CD38缺失对小鼠巨噬细胞TLR2介导的炎症反应的影响及机制研究

发布时间：2017-05-23 18:08

  本文关键词：CD38缺失对小鼠巨噬细胞TLR2介导的炎症反应的影响及机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:CD38是一种以NAD+为底物,具有环化和水解作用的双功能酶,可分别催化NAD+合成c ADPR和水解NAD+或c ADPR成ADPR。敲除小鼠CD38基因可导致组织中NAD+浓度显著升高,Sirt1活性上升。本实验室的前期工作显示:CD38基因缺失可明显加重高脂饮食诱导的Apo E基因敲除小鼠的动脉粥样硬化损伤,并观察到大量巨噬细胞在损伤区域的侵润,提示巨噬细胞在动脉粥样硬化中发挥重要作用。巨噬细胞在不同的微环境下可极化为2种类型:以分泌促炎因子为主的M1型和以分泌抗炎因子为主的M2型。存在于巨噬细胞膜上的Toll样受体(Toll like receptor,TLR)通常可通过促进炎症介质的释放来抵御外来侵害。TLR2的激活可使巨噬细胞产生促炎或抗炎作用,探索CD38缺失对巨噬细胞TLR2作用的影响及机制具有重要意义。方法和结果:1.CD38-/-小鼠原代的腹腔巨噬细胞的培养、分离和功能分析:Western Blot结果显示,敲除CD38基因可明显抑制小鼠巨噬细胞TLR2、Sirt1和p65蛋白表达;2.RAW264.7细胞的培养和功能分析:Real-time PCR结果表明,TLR2激动剂HKLM可使RAW264.7细胞中的IL-1βm RNA表达水平下调,而IL-10 m RNA表达水平上升;3.抑制RAW264.7细胞CD38基因表达及功能分析:利用CRISPR/d Cas9技术抑制RAW264.7细胞CD38基因表达并采用Bio Ray的蛋白芯片检测炎性因子,观察到抑制CD38基因表达可使MCP-1、IL-1alpha、MIP-1 alpha、RANTES、G-CSF蛋白表达显著升高,而Eotaxin2、Fas Ligand、Fractalkine、IL-9、LIX、IL-12 70蛋白表达下降;4.CD38缺失调节巨噬细胞功能的机制分析:Sirt1激动剂白藜芦醇(RSV)显著抑制RAW264.7细胞TLR2、p65和Ac-p65蛋白表达,而Sirt1抑制剂尼克酰胺(NAM)则可明显促进RAW264.7细胞的TLR2蛋白表达。此外,NF-κB抑制剂PDTC可显著抑制RAW264.7细胞TLR2的m RNA及蛋白表达。结论:1.敲除小鼠CD38基因可明显下调巨噬细胞的TLR2、Sirt1和p65表达以及影响巨噬细胞相关炎性因子如IL-1β或抗炎因子如IL-10的表达和分泌,提示CD38介导的TLR2激活可能参与巨噬细胞的炎症反应。2.CD38缺失调节巨噬细胞功能的机制可能与CD38缺失上调Sirt1活性,使NF-κB去乙酰化,阻碍NF-κB对TLR2的转录,最终下调TLR2蛋白的表达有关。
【关键词】：CD38 巨噬细胞 TLR2 炎症反应
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 中英文缩略词表10-11
• 第1章 绪论11-15
• 1.1 研究意义11-12
• 1.2 TLR2 与炎症反应的关系12
• 1.3 CD38 与Sirt112-15
• 第2章 CD38 缺失对TLR2 介导的炎症反应的影响15-40
• 2.1 引言15
• 2.2 材料和方法15-27
• 2.2.1 实验动物、细胞株和质粒15
• 2.2.2 主要试剂和仪器15-16
• 2.2.3 小鼠原代巨噬细胞培养16-17
• 2.2.4 RAW264.7 细胞培养17
• 2.2.5 巨噬细胞CD38 干扰模型建立17-22
• 2.2.6 TLR2 介导的巨噬细胞炎症反应模型建立22
• 2.2.7 蛋白提取和Western Blot22-24
• 2.2.8 RNA提取、反转录和Real-time PCR24-26
• 2.2.9 炎症因子检测26-27
• 2.3 结果27-33
• 2.3.1 CD38 缺失对小鼠巨噬细胞TLR2 蛋白表达的影响27-28
• 2.3.2 TLR2 激动剂对RAW264.7 细胞炎症因子mRNA表达影响28-29
• 2.3.3 RAW264.7 细胞CD38 干扰模型的建立和验证29-31
• 2.3.4 CD38 缺失对RAW264.7 细胞炎症反应的影响31-33
• 2.4 讨论33-40
• 第3章 CD38 基因缺失对Sirt1/NF-κB/TLR2 信号通路调控机制40-45
• 3.1 引言40
• 3.2 材料和方法40-41
• 3.2.1 主要试剂40
• 3.2.2 CD38 基因缺失对小鼠巨噬细胞Sirt1/NF-κB信号通路的影响40
• 3.2.3 Sirt1 激动剂和抑制剂对RAW264.7 细胞TLR2 表达的影响40-41
• 3.2.4 NF-κB抑制剂对RAW264.7 细胞TLR2 表达的影响41
• 3.3 实验结果41-43
• 3.3.1 CD38 基因缺失对小鼠巨噬细胞Sirt1/NF-κB信号通路的影响41-42
• 3.3.2 Sirt1 激动剂和抑制剂对RAW264.7 细胞TLR2 表达的影响42
• 3.3.3 NF-κB抑制剂对RAW264.7 细胞TLR2 表达的影响42-43
• 3.4 讨论43-45
• 第4章 结论45-46
• 致谢46-47
• 参考文献47-51
• 综述51-58
• 参考文献57-58

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 常晓彤;辇晓峰;王振辉;;Toll样受体信号转导途径研究进展[J];生理科学进展;2011年05期

2 ;TRAF-mediated regulation of immune and inflammatory responses[J];Science China(Life Sciences);2010年02期

  本文关键词：CD38缺失对小鼠巨噬细胞TLR2介导的炎症反应的影响及机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：388691