几种川产葛根类药材的品质评价研究

发布时间：2020-03-17 12:38

【摘要】：现行版《中国药典》收载的葛根类药材包括葛根和粉葛,前者为豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi的干燥根,后者为同属植物甘葛藤Pueraria thomsonii Benth的干燥根。四川葛根类药材资源丰富,除上述药典收载品种外,尚有以野生或栽培的峨眉葛Pueraria omeiensis Wang et Tang做粉葛使用,并有商品药材,其在四川分布的资源量仅次于野葛和粉葛。本文在文献研究、药材产地及市场调研的基础上,运用经典的分类及鉴别方法,结合现代仪器分析技术等,通过对川产葛根类药材的系统品质评价研究,弄清其主流品种及质量状况。研究结果如下:1采用常规生药鉴定方法,结合显微化学鉴别法,对葛根、粉葛、峨眉葛进行了较为系统的形态组织学对比研究,找出了三个不同品种在其原植物、药材性状及显微上的主要区别,明确了多糖类、黄酮类成分在组织中的分布。为其品种鉴定提供了参考依据。1.1原植物形态上,主要从叶子分裂情况,被毛情况,花序长度和花冠颜色及花萼颜色上存在差异等方面进行鉴别。1.2药材性状上,主要从表面颜色、药材粉性的强弱、断面环状纹理以及气味等方面进行鉴别。1.3显微特征上,根横切面主要通过晶鞘纤维束数量,导管的大小及分布情况,纤维束数量,石细胞数量等方面进行鉴别;粉末特征主要通过石细胞、分泌组织和晶纤维数量,淀粉粒的单粒和复粒情况等方面进行鉴别。1.4显微化学,不同品种药材中多糖类和黄酮类成分在皮层、韧皮部、木质部均均有不同程度的着色,品种及野生、栽培的不同,其药材中所含多糖类和黄酮类成分存在差异。2在现行版《中国药典》葛根和粉葛薄层色谱鉴别方法的基础上,增加了大豆苷和大豆苷元作为对照品,改善了葛根类药材的薄层色谱鉴别方法,并进行了不同葛根类药材的薄层色谱对比分析,找出了之间的异同。为品种鉴别及化学成分分析提供了参考依据。不同品种样品在三个对照品斑点位置都有对应斑点出现,斑点大小和荧光强度存在差异,表明不同品种中该三种成分含量存在差异;同一品种不同产地的样品其色谱斑点斑点大小和荧光强度存在差异,表明不同产地样品在成分含量上有差异。3建立了葛根类药材近红外光谱分析方法及UPLC指纹图谱分析方法,并进行了不同产地、不同品种葛根类药材的对比分析。为三个品种的鉴别提供了参考依据,并为葛根类药材的质量研究奠定了基础。3.1不同品种、不同产地样品在峰的强弱上存在差异。粉葛和峨眉葛近红外原始图谱、一阶导数图谱在850~950 nm波长段吸收峰,葛根无吸收峰出现,峨眉葛与粉葛近红外原始图谱波形一致;葛根一阶导数图谱在1000~1162nm波长段吸收峰形与粉葛和峨眉葛不同,粉葛与峨眉葛没有差异;葛根二阶数处理图谱在1180~1210nm、1695~1775nm、2095~2195nm波长段峰形与粉葛、峨眉葛存在差异,粉葛与峨眉葛峰形没有明显差异。3.3确定了葛根UPLC指纹图谱29个共有峰,粉葛UPLC指纹图谱18个共有峰,峨眉葛UPLC指纹图谱16个共有峰,并指认了葛根7个峰,粉葛和峨眉葛6个峰。葛根、粉葛、峨眉葛三个品种相似度高,差异较小,可通过色谱中13、14、16、23、25、26、29号峰将葛根与粉葛和峨眉葛进行鉴别;通过色谱中9和19号峰将粉葛与峨眉葛进行鉴别。4参照现行版《中国药典》检查项要求,进行了样品水分、总灰分、酸不溶灰分及二氧化硫残留量检查,并进行了重金属及有害元素和农药残留检测。为弄清四川不同品种葛根类药材的质量状况提供了参考依据。4.1各样品水分和总灰分均符合2015年版《中国药典》规定。不同品种样品的酸不溶性灰分存在差异。4.2二氧化硫残留量测定结果表明,几种样品中,无论是自采药材还是商品药材,未熏硫者的二氧化硫残留量多在50 mg·kg~(-1)以内,但熏硫样品的二氧化硫残留量差异较大,有4批超过现行版药典规定,占熏硫样品的36%。4.3样品中铅、镉、砷、铜、汞的残留量检测结果表明,部分样品不符合标准。4.4农药残留量测定结果表明,所测样品全部符合标准,均未检出六六六(BHC)、滴滴涕(DDT)、五氯硝基苯(PCNB)残留。5根据现行版《中国药典》葛根、粉葛项下相关规定,以稀乙醇为溶剂,热浸法测定了葛根样品醇溶性浸出物;以70%乙醇为溶剂,热浸法测定了粉葛和峨眉葛样品醇溶性浸出物,对比分析不同品种、不同产地之间醇溶性浸出物含量的差异。为进一步研究不同品种葛根类药材质量奠定了基础。测定结果表明,不同品种、不同产地样品醇溶性浸出物含量存在差异。样品5、6、49、52含量小于10.0%,其余样品均符合现行版药典标准。6建立了葛根类药材中总黄酮、多糖含量的紫外分光光度法(UV)测定方法,并进行了样品的测定,分析了不同品种、不同产地葛根类药材在总黄酮及多糖类成分上的差异。为进一步研究不同品种葛根类药材质量提供了参考依据。结果表明,不同产地、不同来源的葛根、粉葛药材总黄酮和多糖含量存在差异。野生峨眉葛总黄酮含量比栽培峨眉葛高,栽培峨眉葛多糖高于野生峨眉葛,栽培峨眉葛总黄酮和多糖含量与粉葛接近。葛根总黄酮含量比粉葛和峨眉葛高,相差近20倍,而粉葛、峨眉葛多糖含量均比葛根高,相差近3倍。7建立了葛根类药材中多成分含量的UPLC-DAD波长切换测定方法,进行了不同葛根类药材样品的含量测定,分析了不同品种、不同产地葛根类药材的差异及各成分之间的相关性。为进一步研究不同品种葛根类药材质量提供了参考依据。7.1测定结果表明,样品中各成分含量差异较大。以现行版《中国药典》中葛根、粉葛葛根素含量标准,所测样品中,粉葛样品不同产地粉葛以1、2、4、8、9、10、13样品含量较高,符合药典规定,分别产自苍溪、旺苍、渠县、江油、简阳、绵阳、射洪,其余自采产地粉葛不符合标准,商品粉葛样品45、47、50、51、55、58、61符合标准,其中以样品50、55、57、58含量较高,其余粉葛样品含量不符合规定,熏硫粉葛与未熏硫粉葛含量没有明显差异;野生峨眉葛样品21~27含量较高,高于0.3%,种植峨眉葛19、20、29、30、31样品及商品峨眉葛49、52中葛根素含量与粉葛相近,样品52含量高于0.3%,其余样品含量低于0.3%;葛根样品除38、39、70样品含量低于2.4%外,其余葛根样品含量均符合药典要求,以32~37样品葛根素含量较高,分别产自平武、青川、北川地区,商品葛根以样品65、67、68、69含量较高。7.2 DPS处理分析软件分析3′-羟基葛根素、葛根素、大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素之间相关性结果表明,各成分之间在含量上存在明显的相关性,在成分含量上相互影响。8首次采用TLC-自显影技术和DPPH抗氧化活性清除率IC_(50)作为指标,进行了不同葛根类药材样品抗氧化活性评测,并分析了样品IC_(50)与各成分含量之间的相关性。为进一步研究和评价葛根类药材质量提供了参考依据。8.1 TLC-自显影结果显示,3′-羟基葛根素、葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木苷、染料木素六个成分斑点及斑点对应的Rf值位置供试品斑点都具有DPPH清除活性,且其他的斑点位置也有微弱的DPPH清除活性。8.2抗氧化活性测定结果显示,葛根以50%乙醇提溶液的抗氧化活性最强,粉葛以70%乙醇溶液物抗氧化活性最强。各成分的抗氧化活性强弱顺序为:3′-羟基葛根素染料木苷大豆苷染料木素大豆苷葛根素。8.3测定了71不同葛根类药材样品抗氧化。结果显示,随着3′-羟基葛根素、葛根素、大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素六个成分含量越高的样品,IC_(50)越小,样品抗氧化能力越强,各个成分含量对样品抗氧化能力的影响程度存在差异,葛根素和3′-羟基葛根素对样品抗氧化能力的影响较为明显。8.4应用DPS处理分析软件分析成分含量与IC_(50)之间的相关性。结果表明,六个成分含量与IC_(50)呈现出显著的负相关,葛根素与IC_(50)的相关性对最显著,其次为3′-羟基葛根素。成分含量越高,抗氧化能力就越强。9采用综合加权评分法和灰色关联度分析法评价方法,并结合聚类分析方法,以样品中总黄酮、多糖、3′-羟基葛根素、葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木苷、染料木素含量及IC_(50)0 9个指标进行了其质量的综合评价分析,客观地反映了样品质量情况。为葛根类药材的进一步研究和质量评价提供了参考方法。结果表明,三种方法综合分析结果基本一致。粉葛以8、9、50、51号样品的质量较好,8、9号样品分别产自江油、简阳;峨眉葛以21~27号样品的质量较好,分别为产自苍溪、旺苍、峨眉山、雷波、金阳地区的野生峨眉葛;葛根以32~37、40(分别产自平武、青川、北川和苍溪地区)、65、67、68、69号样品的质量较好,41、42号样品的质量次之,分别产自旺苍、青白江。
【图文】：

葛根,形成层,韧皮部,射线

葛根根横切面简图

横切面,形成层,韧皮部,射线

粉葛根横切面简图
【学位授予单位】：成都中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284.1

【参考文献】