混合模式凝胶—反相联用色谱体系的构建与红花化学成分研究

发布时间：2020-03-17 23:05

【摘要】：本研究针对二维液相在复杂样品分离中的不足,结合新的混合模式色谱,构建基于Sephadex LH-20 × RPLC联用的新型二维色谱方法体系,并探索该系统在中药材分析和分离制备上的应用。构建Sephadex LH-20与反相色谱联用的在线分析系统,以含多个化合物的模式混合物作为研究对象,通过探究各化合物的液相保留行为证明了葡聚糖凝胶在甲醇/水洗脱模式下可兼具尺寸排阻、氢键吸附、分配三种分离机制。以红花作为研究对象,在确定溶剂洗脱模式的基础上考察第一维Sephadex LH-20柱的柱长、流速等因素对分离效果的影响,确定分离参数;选择适合该二维系统的接口;将构建的Sephadex LH-20 × RPLC联用模式与RPLC × RPLC联用模式和HILIC × RPLC联用模式进行分离效果的比较,Sephadex LH-20 × RPLC联用模式显示出了远优于其他两个联用模式的正交性分离度(72.9%),同时强大的样品承载力预示其可为复杂样品提供更为丰富的成分信息。选取藏红花、银杏叶、栀子、射干等中药作为分析对象,进一步证实了 Sephadex LH-20×RPLC系统在中药材分析中的潜在分离能力。最后本研究将构建的Sephadex LH-20 × RPLC联用模式放大到制备规模,选取红花水提物作为研究对象进行全二维在线制备分离和传统一维制备分离,采用高效液相色谱法(HPLC)对化合物进行纯度分析并结合核磁共振、质谱等手段进行化合物结构鉴定与解析。最终,从红花中制备分离得到24个化合物,其中在线制备并鉴定了 11个化合物,离线制备得到并鉴定了 22个化合物。综上,本研究成功构建了一种混合模式Sephadex LH-20 × RPLC二维液相色谱系统,对水溶性样品具有良好的分离效果,为中药材的成分分离提供了一个新的思路。
【图文】：

示意图,在线分析,示意图,梯度

图２－１在线分析Ｓｅｐｈａｄｅｘ邋ＬＨ－２０邋ｘ邋ＲＰＬＣ系统的示意图逡逑２．４邋Ｓｅｐｈａｄｅｘ邋ＬＨ－２０柱的分离原理阐述逡逑本实验选取了邋１７个模式化合物的混合物（图２－１）作为研宄对象。通过探讨逡逑这些化合物的结构特点和在Ｓｅｐｈａｄｅｘ邋ＬＨ－２０上的保留行为之间的关系，证明逡逑Ｓｅｐｈａｄｅｘ邋ＬＨ－２０柱的分离原理。同时，实验以等度和梯度两种洗脱方式，探宄在逡逑不同洗脱条件下Ｓｅｐｈａｄｅｘ邋ＬＨ－２０柱分离原理的变化。实验条件如下：逡逑供试样品：模式化合物混合液；进样量：１０邋ＨＬ；波长：２４０邋ｎｍ；逡逑第一维色谱柱：手工填装邋Ｓｅｐｈａｄｅｘ邋ＬＨ－２０邋柱（１００邋ｃｍ邋ｘ邋１．６邋ｍｍ邋ｉ．ｄ．）逡逑等度洗脱条件：逡逑１）逦第一维液相色谱参数：流动相：甲醇；等度洗脱时间：５００邋ｍｉｎ；逡逑流速：０．０２邋ｍＬ／ｍｉｎ；逡逑２）逦稀释程序：稀释液：０．２％甲酸水；梯度时间：０—５００邋ｍｉｎ；逡逑流速：０．５邋ｍＬ／ｍｉｎ；逡逑梯度洗脱条件：逡逑１）逦第一维液相洗脱梯度：流动相：甲醇（Ｂ）邋／水（Ａ）；时间梯度：０—３００逡逑—５００邋ｍｉｎ；梯度洗脱程序邋０％Ｂ—邋１００％Ｂ—邋１００％Ｂ；流速：０．０５邋ｍＬ／ｍｉｎ；逡逑２）逦稀释程序：洗脱液：０．２％甲酸水；梯度时间：０—３００—５００邋ｍｉｎ；流速：逡逑０—０．５邋—０．５邋ｍＬ／ｍｉｎ；逡逑２８逡逑

红花,洗脱,反相色谱,粗提物

６．３邋—邋７—７．１邋—８邋ｍｉｎ；梯度洗脱程序邋０％Ｂ—４０％Ｂ邋—邋６０％Ｂ—１００％Ｂ—１００％Ｂ—逡逑０％Ｂ—０％Ｂ；流速：２．５ｍＬ／ｍｉｎ；温度：５０°Ｃ；波长：２７５邋ｎｍ。逡逑红花的第二维反相色谱的分析采用了一个８分钟的色谱条件，如图２－４所示，，逡逑红花粗提物得到了较好的分离。由于红花粗提物的成分复杂，一个较短的二维分逡逑析时间会严重影响样品在反相色谱上的分析效果。逡逑ｓ邋Ｓｆ＊ｒ：逡逑ＺＣ＇逡逑Ｋ逡逑Ｉ邋丨ｌ逡逑？；■逦逡逑逦ｉ逦ｉ逦ｊ逦＊逦ｉ逦？逦？逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－邋４邋ＨＰＬＣ邋ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ邋ｏｆ邋Ｓａｆｆｌｏｗｅｒ邋ｔｅｓｔ邋ｓｏｌｕｔｉｏｎ逡逑图２－４红花样品溶液ＨＰＬＣ图逡逑２．５．２逦第一维洗脱模式的选择逡逑基于本章２．４关于在不同洗脱模式下对Ｓｅｐｈａｄｅｘ邋ＬＨ－２０分离模式的探究，我逡逑们己证实了不同洗脱模式对于Ｓｅｐｈａｄｅｘ邋ＬＨ－２０分离机制的影响。同样，Ｓｅｐｈａｄｅｘ逦｜逡逑３１逡逑
【学位授予单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284.1

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