化痰通瘀解毒方对人胃癌MKN-45细胞上皮间质转化及侵袭转移的影响

发布时间：2020-03-19 11:40

【摘要】：目的:观察化痰通瘀解毒方(Huatan-Tongyu-Jiedu Decoction,HTJD)对人胃癌MKN-45细胞上皮间质转化及侵袭转移能力的影响。方法:1.采用转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导人胃癌MKN-45细胞上皮间质转化模型;2.观察不同浓度化痰通瘀解毒方水提取物对TGF-β1诱导的人胃癌MKN-45细胞侵袭转移能力的影响;分别采用细胞划痕法和Transwell小室法观察对人胃癌细胞迁移能力和侵袭能力的影响;3.观察不同浓度化痰通瘀解毒方水提取物对TGF-β1诱导的人胃癌MKN-45细胞上皮间质转化相关标志物的影响;采用Western blot法检测人胃癌MKN-45细胞E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和Snail蛋白表达;采用ELISA法检测人胃癌MKN-45细胞E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP-7,9蛋白表达。结果:1.划痕实验结果显示,与空白组比较,模型组细胞划痕愈合率明显升高(P0.01);与模型组比,化痰通瘀解毒方10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL剂量组划痕愈合率明显减小(P0.05或P0.01);且划痕愈合率在(5~40)μg/mL各剂量组间呈一定剂量依赖性(P0.05或P0.01);2.Transwell侵袭实验结果显示,与空白对照组比,模型组细胞穿膜数明显增多(P0.01);与模型组比较,化痰通瘀解毒方10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL剂量组细胞穿膜数明显减少(P0.01);在(10~40)μg/mL各组之间呈一定剂量依赖性(P0.05或P0.01);3.Western blot检测结果显示,与空白组比,模型组N-cadherin、Vimentin及Snail蛋白的表达显著上调(P0.01),E-cadherin蛋白的表达显著下调(P0.01);与模型组比,化痰通瘀解毒方10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL剂量组N-cadherin、Vimentin及Snail蛋白表达显著下调(P0.05或P0.01),E-cadherin蛋白表达明显上调(P0.05或P0.01);在(5~40)μg/mL剂量组间呈一定剂量依赖性;4.ELISA结果显示,与空白组比较,模型组人胃癌MKN-45细胞N-cadherin、Vimentin和MMP-7,9的含量明显上调(P0.01),E-cadherin的含量显著下调(P0.01);与模型组比较,化痰通瘀解毒方10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL剂量组N-cadherin、Vimentin和MMP-7,9的含量明显下调(P0.05或P0.01),E-cadherin的含量明显上调(P0.05或P0.01);在(5~40)μg/mL剂量组间呈一定剂量依赖性。结论:1.化痰通瘀解毒方能够抑制人胃癌细胞MKN-45侵袭、迁移能力。2.化痰通瘀解毒方能够通过调控人胃癌细胞MKN-45上皮间质转化相关标志物发挥抑制侵袭转移作用。
【图文】：

空白图,人胃癌细胞,空白,组图

A.空白组 B.模型组 C.HTJD（2.5μg/mL）组 D.HTJD（5μg/mL）组 E.HTJD（10μg/mL组 F.HTJD（20μg/mL）组 G.HTJD（40μg/mL）组图 2.HTJD 对 TGF-β1 作用人胃癌细胞 MKN-45 后侵袭能力的影响（×200）（与空白组相比*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01；HTJD 组间比较，△P<0.05，△△P<0.01A.blank control group B.Model group C.HTJD（2.5μg/mL）group D.HTJD（5μg/mL）grouE.HTJD（10μg/mL）group F.HTJD（20μg/mL）group G.HTJD（40μg/mL）groupFig2. effect of HTJD on invasion ability of human gastric cancer cells MKN-45 afterTGF-β1 treatment（×200）（Compared with blank control group，*P<0.05，**P<0.01；Compared with Model group，#P<0.05，##P<0.01；Comparison among HTJD groups ,△P<0.05△△P<0.01）

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图 4. HTJD 对人胃癌 MKN-45 细胞 E-cadherin、N-cadherin 含量的影响Fig4. Effect of HTJD on the contents of E-cadherin and N-cadherin in Human GastricCancer Cells MKN-454.3.5 对人胃癌 MKN-45 细胞 Vimentin 含量的影响采用 ELISA 技术检测胃癌细胞株 MKN-45 上 Vimentin 蛋白的表达情况。算方法同 3.3.2，回归方程是 y=158.73x-4.84，R2=0.9999。检测结果显示，与空组比较，模型组中 Vimentin 的含量显著升高（p<0.01）；与模型比较，HTJD度 20、40μg/mL 组显著下降（p<0.01）；HTJD 各组间比较，（10、20、40）μg/m之间随浓度升高，Vimentin 含量降低（p<0.01），呈现剂量依赖性。结果见表图 5。表 2. HTJD 对人胃癌 MKN-45 细胞 Vimentin 含量的影响（ x ±s，n=3）Tab2. Effect of HTJD on the content of Vimentin in Human Gastric Cancer Cells MKN（ x ±s,n=3）
【学位授予单位】：安徽中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285

【参考文献】