【摘要】：目的:采用UHPLC-LTQ-Orbitrap MS~n法对龙胆酒制前后饮片中化学成分进行定性研究,确定生龙胆和酒龙胆成分组成的差异;采用HPLC法对龙胆酒制前后进行环烯醚萜类成分的含量测定,明确二者的异同;采用HPLC法对龙胆酒制前后在大鼠体内龙胆苦苷的药代动力学和组织分布进行含量的对比。通过以上的研究,从化学成分的角度阐明龙胆酒制的机理,进而为龙胆酒制工艺的优化、酒制饮片质量标准的建立,以及临床用药提供参考。材料与方法:1.采用UHPLC-LTQ-Orbitrap MS~n法对生龙胆和酒龙胆中化学成分进行定性分析,并结合主成分分析(PCA)和偏最小二乘判别分析(PLS-DA),明确炮制对其成分组成的影响。2.以液质联用数据中VIP值(阈值)和总离子流图峰面积较大的3个成分为含量测定指标,即龙胆苦苷、獐牙菜苦苷和獐牙菜苷(3个化合物均为环烯醚萜类),采用HPLC法对22个地区生龙胆和相应自制酒龙胆进行含量测定,考察酒制前后龙胆中环烯醚萜类成分的含量差异。3.以SPF级别的SD大鼠为实验研究对象,将大鼠随机分为空白对照组、生龙胆组、酒龙胆组。给药组分别灌胃给予一定剂量的生龙胆和酒龙胆提取液,对照组给予等量生理盐水。在给药后0.083,0.016,0.25,0.5,1,1.5,2,3,4,6,8,10,12 h时,进行大鼠眼眶取血,样品处理后,采用HPLC法测定龙胆苦苷的血药浓度,经DAS 3.0程序处理数据,比较龙胆苦苷药动学参数,绘制药-时曲线,阐明酒制是否能促进指标成分(龙胆苦苷)的吸收,提高其生物利用度。4.将SD大鼠随机分为空白对照组、生龙胆组、酒龙胆组。生龙胆组和酒龙胆组灌胃给予一定剂量的生龙胆和酒龙胆的提取液,采用HPLC法测定龙胆苦苷在不同时间、不同组织(心、肝、脾、肺、肾、胃、大肠、小肠)中入血的浓度,计算不同时间点的分布经时变化,获得生龙胆和酒龙胆作用靶器官的信息。结果:1.实验结果显示,在生龙胆中确定出44个化学成分,在酒龙胆中确定出42个化学成分,其中存在34个共有化学成分,但有10个成分只存在于生龙胆,有8个成分只存在于酒龙胆。由于生龙胆和酒龙胆取样量相同,通过比较其共有化学成分的峰面积,可知龙胆酒制后含量变化情况。生龙胆峰面积与酒龙胆峰面积比值(生/酒)小于0.8时,表明酒制后使其含量增加,而峰面积比值大于1.2时,则表明酒制后使其含量降低。龙胆经过酒制后,7个化学成分峰面积显著增加,4个化学成分显著降低。在实验数据筛选出20种有显著差异的成分(VIP值5),其中正离子模式下发现6种,分别是depressoside、獐牙菜苦苷、龙胆苷、primeverosyl-1-decussatin、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷和齐墩果酸;在负离子模式下发现17种,分别是龙胆苦苷、depressoside、rindoside、8-O-glucosyl bellidifolin、獐牙菜苦苷、isoscoparine、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、马钱苷酸、1,3,4-三羟基-8-β-D-葡萄糖苷-5,6,7,8-四氢酮、eustomoside、glucosyl-8-swertianin、2′′-O-β-D-葡萄糖基异牡荆素、isoscoparine-7-O-β-D-glucosyle、獐牙菜苷、芒果苷、1-O-D-glucopyransylampexine、1-羟基-2,3,4,7-四甲氧基酮。通过对这些差异化合物的分析发现,可知酒制可使龙胆的化学成分发生改变。2.通过测定22个不同地区龙胆酒制前后龙胆苦苷、獐牙菜苦苷和獐牙菜苷的含量,发现酒制导致龙胆苦苷的含量有所增加,使獐牙菜苷和獐牙菜苦苷的含量发生不一致的变化。3.通过对龙胆饮片酒制前后药代动力学研究,可以看出,酒制后龙胆苦苷达峰时间提前,达峰浓度下降。4.通过对龙胆饮片酒制前后组织分布研究,由数据可知,酒制后龙胆苦苷在上焦脏器(心、肝、肺)中分布增加。结论:1.明确了生龙胆和酒龙胆的差异性成分。2.明确了龙胆经过酒制后,可使龙胆苦苷升高,为酒龙胆的炮制机理研究奠定基础。3.明确了龙胆经过酒制后,可促进龙胆苦苷的作用速度。4.明确了龙胆经过酒制后,可使龙胆苦苷在上焦脏器(心、肝、肺)分布增加,推测其为龙胆酒制升提的原因之一。
【图文】：
- 13 -B3图 1-1. 对照品、生龙胆和酒龙胆总离子流图A：正离子模式；B：负离子模式；1：对照品；2：生龙胆；3：酒龙胆2 数据分析2.1 化学物的分析与鉴定将所得数据中精确的分子量，，在可能的元素组成范围内推断其分子式。先查阅文献
生龙胆和酒龙胆饮片中化合物的结构
【学位授予单位】：辽宁中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R283
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5 詹雅Z
本文编号：2591188
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