光甘草定对脂多糖诱导大鼠肺损伤的保护作用及机制研究

发布时间：2020-03-20 18:06

【摘要】：目的:探讨光甘草定(GlabridinGLA)对正常大鼠的肺组织以及脂多糖(Lipopolysaccharide LPS)致急性肺损伤(Aute lung injury ALI)大鼠的肺组织在肺水肿及病理改变方面的影响。方法:96只Wistar大鼠按随机数字表法分为对照(Control6h、12h、24h)组、光甘草定(GLA6h、12h、24h)组、模型(LPS6h、12h、24h)组、光甘草定治疗(LPS+GLA6h、12h、24h)组,每组8只。采用脂多糖(10mg/kg)腹腔注射的方法制备大鼠肺损伤模型,光甘草定组仅予以光甘草定灌胃(30mg/kg),光甘草定治疗组在腹腔注射脂多糖后1h予以光甘草定灌胃(30mg/kg),对照组腹腔注射同等剂量的生理盐水,各组大鼠在给药后6h、12h、24h分别留取肺组织标本。测量肺组织湿重及干重,计算肺组织湿/干质量(Wet/DryW/D)比值;肺组织进行HE染色,光镜下观察肺组织病理改变。结果:1.与对照组比较,模型组各组肺组织湿/干重比均增加(P0.05),且以12h组改变最明显,提示此模型中12h肺水肿最明显;光甘草定治疗组肺湿/干重比值均较模型组降低(P0.05);光甘草定组和对照组两组间差异无统计学意义。2.HE染色光镜结果,对照组和光甘草定组肺组织结构完整清晰、肺泡壁无充血水肿,肺间质也无炎性细胞浸润;模型组肺泡壁弥漫性增厚、部分肺泡壁结构破坏,间质明显可见炎性细胞浸润、部分肺泡可见出血;光甘草定治疗组病理改变较模型组明显减轻。结论:1.光甘草定具有减轻脂多糖致肺水肿及肺组织病理改变的作用;2.光甘草定对正常大鼠肺组织肺水肿及肺组织病理变化无影响。目的:探讨光甘草定通过抗炎、抗氧化等作用缓解脂多糖诱导大鼠急性肺损伤的机制。方法:96只Wistar大鼠按随机数字表法分为对照(Control 6h、12h、24h)组、模型(LPS 6h、12h、24h)组、光甘草定治疗(LPS+GLA6h、12h、24h)组、乌司他丁治疗(LPS+UTI6h、12h、24h)组,每组8只。采用脂多糖(10mg/kg)腹腔注射的方法制备大鼠肺损伤模型;光甘草定治疗组:左侧腹腔注射脂多糖10mg/kg,1小时后给大鼠经灌胃途径给予光甘草定(30mg/kg);乌司他丁组在左侧腹腔注射脂多糖后1h后在右侧腹腔注射乌司他丁 20000u/kg;对照组注射同等剂量的生理盐水。各组大鼠在不同时间点留取血浆及肺组织标本。检测各组血浆中肿瘤坏死因子-a(tumor necrosis factor-a TNF-a)、白细胞介素-18(interleukin-18 IL-18)、肺表面活性物质A(surfactant protein A,SP-A)含量以及肺匀浆中超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase SOD)、丙二醛(Malondialdehyde MDA)、一氧化氮(Nitric Oxide NO)含量变化。结果:1.与对照组比较,模型组血浆TNF-a、IL-18含量明显增高(P0.05),光甘定和乌司他丁均可抑制TNF-a、IL-18增加(P0.05),且光甘草定效果由于乌司他丁。2.对照组血浆中SP-A含量较低,模型组大鼠血浆中SP-A水平均较对照组增加,但6h组比较差异无统计学意义(P0.05),12h和24h组比较差异有统计学意义(均P0.05);而光甘草定和乌司他丁均可抑制脂多糖所致SP-A增加(均P0.05),光甘草定抑制效果与乌司他丁比较差异无统计学意义(P0.05)。3.与对照组比较,模型组肺组织MDA含量均明显增加,差异有统计学意义(P0.05);光甘草定治疗和乌司他丁治疗组肺组织MDA含量均较模型组明显下降,差异有统计学意义(P0.05)。光甘草定治疗组和乌司他丁治疗组间差异无统计学意义。4.与对照组比较,模型组肺组织NO含量6h组比较差异无统计学意义,12h和24h组NO含量均明显增加(P0.05);光甘草定治疗组肺组织NO含量数值均较模型组下降,但12h组比较差异有统计学意义(P0.05),6h和24h组差异无统计学意义(P0.05);与模型组比较,乌司他丁治疗组肺组织NO含量数值均较模型组下降,但12h组比较差异有统计学意义(P0.05),6h和24h组差异无统计学意义(P0.05),与光甘草定治疗组和对照组比较,乌司他丁治疗组NO含量数值均明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。光甘草定抑制NO效果优于乌司他丁。5.与对照组比较,模型组肺组织SOD含量均明显减少,差异有统计学意义(P0.05);光甘草定治疗组肺组织SOD含量较模型组明显上升,差异有统计学意义(P0.05);而乌司他丁治疗组肺组织SOD含量较模型组呈上升趋势,但差异无统计学意义(P0.05)。且光甘草定治疗组肺组织SOD含量较乌司他丁治疗组明显升高,差异有统计学意义(P0.05),提示光甘草定可明显增加肺损伤大鼠肺组织的SOD含量,且作用效果优于乌司他丁。结论:1.光甘草定通过抑制炎症因子从而减轻炎症反应,发挥对脂多糖致大鼠肺损伤的保护作用。2.光甘草定通过清除氧自由基,调节氧化/抗氧化平衡发挥对脂多糖致大鼠肺损伤的保护作用。3.光甘草定可通过调节肺表面活性物质含量,改善肺泡表面张力及通透性来发挥脂多糖诱导大鼠急性肺损伤。目的:探讨p38MAPK/ERK信号通路在脂多糖致肺损伤中的作用以及光甘草定通过对p38MAPK/ERK信号通路的抑制作用而发挥肺保护作用的机制。方法:80只Wistar大鼠按随机数字表法分为对照(Control)组、模型(LPS6h、12h、24h)组、光甘草定治疗(LPS+GLA6h、12h、24h)组、乌司他丁治疗(LPS+UTI 6h、12h、24h)组,每组8只。采用腹腔注射脂多糖(1Omg/kg)的方法制备大鼠肺损伤模型;光甘草定治疗组在腹腔注射脂多糖后1h予以光甘草定灌胃(30mg/kg);乌司他丁治疗组在左侧腹腔注射脂多糖1Omg/kg,1小时后给大鼠经右侧腹腔注射UTI20000U/kg;对照组腹腔注射同等剂量的生理盐水;各组大鼠在给药后6h、12h、24h留取肺组织。免疫组化法检测p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase p38MAPK)、细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular-signal regulated protein kinase ERK)蛋白表达情况;Western blot法检测肺组织中磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)及磷酸化ERK(pERK)蛋白表达的变化。结果:1.p-p38MAPK的免疫组化结果:对照组肺组织胞核中p-p38MAPK阳性信号极弱。模型组大鼠p-p38MAPK阳性信号表达明显增强,主要分布于气道上皮细胞、肺泡上皮细胞、血管内皮细胞和浸润的炎性细胞内,胞质表达无差异,胞核表达明显增强;与模型组比较,光甘草定治疗组和乌司他丁治疗组肺组织磷酸化p38MAPK阳性细胞分布相似,但胞核阳性细胞显著减少,而且表达强度较模型组明显减弱。2.p-ERK的免疫组化结果:对照组胞质内p-ERK表达极弱,散在分布于气道上皮细胞和肺泡上皮细胞内胞质内;模型组炎性细胞、气道上皮细胞、肺泡上皮细胞和血管内皮细胞胞质及胞核内均可见磷酸化ERK阳性细胞表达;光甘草定治疗组及乌司他丁治疗组胞质及胞核阳性细胞表达较模型组明显减少。3.p-p38MAPK的Western-blot结果模型组肺内p-p38MAPK的表达明显增加,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);光甘草定治疗组能明显抑制脂多糖诱导的p38MAPK的磷酸化,且其抑制作用较UTI组强;而各组间p38MAPK的表达无明显差异。4.pERK的Western-blot结果(图3-4):模型组肺内ERK及pERK表达均增强,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05),光甘草定组能明显抑制脂多糖诱导的ERK及其磷酸化,但其抑制作用较UTI略弱。结论:光甘草定通过抑制p38MAPK/ERK信号通路发挥对脂多糖致大鼠肺损伤的保护作用
【图文】：

干重,组间

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干重,比值比,肺组织,组间

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【学位授予单位】：武汉大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

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