没食子酸对大鼠心房ANP分泌和机械活动的影响

发布时间：2020-03-23 03:06

【摘要】：目的:没食子酸(gallic acid,GA)能抵抗心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤,改善心肌肥大和纤维化,并发挥抗炎作用。然而,没食子酸对心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)分泌的影响尚不清楚。因此,本研究的目的是利用离体搏动的大鼠心房灌流模型和在体灌注模型观察没食子酸对ANP分泌和心房机械活动的影响并探讨其作用机制。方法:本实验采用大鼠离体搏动的心房灌流模型和在体实验模型;利用放射免疫法测定大鼠心房ANP的含量;采用蛋白免疫印迹(western blot,WB)分析心房肌细胞蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)亚型蛋白含量表达的变化。结果:1.没食子酸(0.01,0.05,and 0.1μmol/L)以浓度依赖性方式增加ANP的分泌,同时发挥正性肌力作用(与对照循环比较,P0.05,n=6),其中0.1μmol/L的没食子酸效果最强(与对照循环比较,P0.05,n=6)。而且,没食子酸(0.1μmol/L)也显著增加大鼠血浆ANP含量和血流动力学(与对照组比较,P0.05,n=8)。2.没食子酸上调心房肌组织PKCβ和PKCε蛋白表达的同时(与对照组比较,均P0.05,n=5),明显促进ANP的分泌并对心房机械活动发挥正性肌力作用(与对照循环比较,均P0.05,n=6)。这些作用可被PKCβ的阻断剂LY333531(0.5μmol/L)和PKCε的阻断剂EAVSLKPT(0.3μmol/L)完全阻断(与GA组比较,均P0.05,n=5)。3.PKCα阻断剂G(?)6983(0.5μmol/L)明显的减缓没食子酸促进ANP分泌的效应,并可完全翻转没食子酸对心房机械活动的作用(与对照循环比较,均P0.05,n=6)。4.PKCδ的阻断剂Rottlerin(1.0μmol/L)对没食子酸促进ANP的分泌和心房肌发挥正性肌力作用未产生显著影响(与对照循环比较,均P0.05,n=6)。5.PLC的阻断剂U73122(3.0 μmol/L)不仅完全阻断没食子酸上调PKCβ和PKCε蛋白表达的作用(与GA组比较,P0.05,n=6),而且也完全解除没食子酸促进ANP分泌的效应,并翻转没食子酸对心房肌的正性肌力作用(与对照循环比较,均 P0.05,n=6)。6.Ca~(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II的阻断剂KN62(3.0μmol/L)反而强化没食子酸增加ANP分泌的效应,并翻转没食子酸对心房的正性肌力作用(与对照循环比较,均P0.05,n=6)。结论:没食子酸通过PLC-DAG-PKC和PLC-IP3-Ca2+信号转导途径促进大鼠ANP分泌,同时对心房肌发挥正性肌力作用。
【图文】：

模型图,心房,模型图,大鼠

维持心房搏动。逡逑心房搏动压的变化（倍数）＝（给药后的搏动压水平－基础搏动压水平）／逡逑基础搏动压水平。逡逑利用手术线将心房固定在透明聚乙烯套管的一端后，将套管置于逡逑２．０ｃｍ＞＜４．Ｏｃｍ的玻璃培养皿中，，并且心房组织没于培养皿底部体积为３ｍｌ的逡逑ＨＥＰＥＳ缓冲液中，确保心房组织不贴壁后，立即连接恒速蠕动栗向心房腔内持逡逑续灌注氧饱和的ＨＥＰＥＳ缓冲液，装置另一端会有心房灌流液流出。培养皿与恒逡逑温水浴箱连接，使大鼠心房的温度维持在３７°Ｃ左右，与在体所需温度保持一致。逡逑给予心房３５Ｖ、１．５Ｈｚ的连续单刺激以维持心房搏动。经过６０ｍｉｎ的稳定期之后，逡逑方可正式开始实验，每１２ｍｉｎ设定为一个循环，每２ｍｉｎ收集一次心房灌流液以逡逑用于测定ＡＮＰ含量的变化。逡逑

示意图,示意图,滤纸,夹板

磁力搅拌器充分混匀。转膜前至少３０ｍｉｎ用预冷的转膜液浸泡转膜滤纸和，每块胶使用两块海绵、六片薄滤纸或两片厚滤纸。剪好与胶体大小相同的逡逑ＤＦ膜，转膜前５ｍｉｎ将其浸泡于预冷过的甲醇溶液中，使ＰＶＤＦ膜上的电荷逡逑分活化，提高转膜效率。逡逑转膜：由下至上将黑夹板（阴极）、海绵垫、３层滤纸、凝胶、ＰＶＤＦ膜、３逡逑滤纸、海绵垫、白夹板（阳极）按顺序依次摆好，为了确保“三明治”紧密贴合，逡逑胶与ＰＶＤＦ膜必须对齐。另外，每放一层都应排尽气泡，如果有气泡，可用光逡逑的试管在表面轻轻滚动，以排除气泡。“三明治”转膜如图３所示。逡逑按装置电极正确连接好装置，接通电源，确保电荷由负极向正极流动，置Ｃ冰箱后，选用低电压９０Ｖ恒压转膜大约３０－６０ｍｉｍ转膜时间需依据凝胶的厚逡逑和目标蛋白的大小而定，目标蛋白分子量越大，所需转膜时间越长，反之则转逡逑时间越短。逡逑转膜结束后，切断电源，打开转膜夹板，小心取出ＰＶＤＦ膜并做好标记。逡逑＜邋７邋Ｖ邋７１—（＂邋：■邋（＂＞邋ｆ邋ｙ￣７邋Ｔ邋７１邋Ｃ邋｝邋…厂邋ｙｎ邋ｎ邋厂）灸逦逡逑
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

【参考文献】