淫羊藿的质量分析与2-喹诺酮类衍生物化学合成及其抗肿瘤作用研究

发布时间：2020-03-23 20:54

【摘要】：本论文由两部分组成,第一部分为淫羊藿的质量分析研究,第二部分由2-喹诺酮类衍生物化学合成及其抗肿瘤作用研究。（一）淫羊藿(Epimedii Folium)为常用传统中药,收载于历年版《中华人民共和国药典》一部。具有补肾阳、强筋骨、祛风湿之功效。该中药广泛应用于中医临床配伍组方治疗多种疾患,亦为诸多中成药和保健药品的原料药材。为了有效控制淫羊藿药材的质量,本论文对其有效成分群进行了含量分析研究,以期在《中国药典》再版时为淫羊藿的质量标准修订提供实验依据。本实验采用现代超高效液相色谱法(UPLC-DAD),对淫羊藿有效成分群的总含量进行了分析研究,建立了含量测定方法。以淫羊藿药材为对象,同谱检测了5种含量较高的黄酮类有效成分。所建立的含量测定方法线性关系良好,精密度、重复性、稳定性和回收率等试验均符合要求(RSD3%)。本含量测定方法具有一谱测定多种成分的特点,同时具有分析时间短、分离效果好、进样量少、溶剂消耗少等优点。采用本含量测定方法,对14批次淫羊藿有效成分群总含量进行了分析比较研究,其检测结果能有效评价不同产地药材的质量;从而为该药材建立了一种可靠的质量分析方法,能较全面反映其内在质量。（二）喹诺酮类化合物是很多中药中重要有效成分。据文献报道,很多芸香科植物的中药抗肿瘤活性成分是2-喹诺酮类化合物。因此,本论文以2-喹诺酮作为先导化合物进行了化学合成研究,以期发现高效抗肿瘤化合物,为研究新型抗肿瘤药物提供目标化合物。本文以喹啉系列化合物为反应起始物,经甲基化和氧化反应制得2-喹诺酮类中间产物;经硝化反应得到硝化了的2-喹诺酮类衍生物;再经cine-substitution反应获得1-甲基化-4-氰化-2-喹诺酮类衍生物,这些化合物的结构经1H NMR,13C NMR和HR-MS得以确证。采用MTT法评价了合成的部分2-喹诺酮类化合物抑制MCF-7,CT-26,A549,H1299,PC-12及Hep G-2肿瘤细胞增殖的作用。研究结果表明,部分的化合物对这6种不同的肿瘤细胞的抗增殖活性明显高于喹啉系列物,其中1,8-二甲基-3,5,7-三硝基-2-喹诺酮(化合物15)对6种肿瘤细胞的增殖表现出显著的抑制作用,其中对A549的抑制活性最高,IC50为2.05μmol·L-1。1-甲基-6,8-二硝基-4-氰基-2-喹诺酮可选择性抑制A549和CT-26细胞,IC50分别为9.34μmol·L-1和18.4μmol·L-1。采用Annexin V-FITC/PI双标记法及Western blot蛋白质免疫印迹学法,以A549细胞为受试对象,对化合物1,8-二甲基-3,5,7-三硝基-2-喹诺酮(化合物15)的抗肿瘤作用机制进行初步研究。结果显示,化合物15能够明显抑制A549细胞增殖,并呈剂量和时间依赖性。流式细胞仪检测到化合物15诱导A549细胞发生凋亡,其凋亡率在一定浓度范围内呈剂量依赖性。蛋白质免疫印迹法Western blot表明在不同浓度(0、1.25、2.5和5μg·m L-1)的化合物15作用A549细胞12 h后,Cleaved-Caspase-3及Bax的表达随药物浓度的增大而上调,Bcl-2的表达随药物浓度的增大而下调。故推测化合物15可能是通过线粒体凋亡途径来诱导A549肺癌细胞发生凋亡。同时检测了PI3K/AKT/FOXO1通路相关蛋白,结果发现其可下调p-AKT和p-FOXO1的表达,上调Bim的表达。故推测化合物15可能通过抑制PI3K/AKT/FOXO1信号通路诱导A549肺癌细胞发生凋亡。
【图文】：

叠加图,淫羊藿属,淫羊藿,不同产地

2.5 淫羊藿特征图谱的建立收集到不同来源的 14 批淫羊藿药材，经本实验室鉴定其均为淫羊藿属。取不同产地或批次的淫羊藿药材 0.1 g，精密称定，，按照“2.3”项下的方法，制备供试品溶液，按照“2.1”项下色谱条件，进样。

喹诺酮

characteristics of N-unsubstituted and substituted基本母核的化学合成合成通常有三种方法：（1）直接的喹合；（3）环转换。这三种方法是相辅环饰喹啉环的方法就是先使 MeQone 甲基甲酯反应生成中间体 N-甲基喹诺酮盐二甲酯或者是碘甲烷。接着进行的氧化应。尽管可以用高锰酸钾或氧化活性二低。另一方面，在碱性条件下进行分子一种有效的方法。
【学位授予单位】：湖北中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284;R285

【参考文献】