蝼蛄提取物对卒中后大鼠神经炎症细胞和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响

发布时间：2020-03-24 02:48

【摘要】：目的:缺血性卒中(Ischemic stroke)是世界范围内死亡和残疾的主要原因,目前治疗手段有限,迫切需要开发新的中风治疗方法。中医(TCM)是公认的药物发现来源,中医在中国已有两千多年的历史,中药疗法是治疗中风的一种有希望的方法。炎症和凋亡在脑缺血发病机制中起着重要作用,可能是治疗的靶点之一。蝼蛄为昆虫类药材,具有镇静、利尿、降压、通便、止痛、抗结核、神经保护等多种作用,以其入药的组方在多种医药典籍均有记载,在临床中也有广泛应用。本实验采用局灶性脑缺血永久性大鼠模型,行pMCAO手术,观察蝼蛄提取物对大鼠脑缺血后行为学、梗死体积、小胶质细胞及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响。方法:96只雄性SD大鼠(250-300g)被随机分为假手术组(Sham)、模型组和蝼蛄提取物干预组(Mole Cricket),每组32只。其中15只鼠(每组5只)于术后24小时处死进行TTC染色,剩余81只鼠按处死的时间点分为1天、3天、7天四个亚组,每亚组各9只。采用线栓法使左侧大脑中动脉闭塞以制备局灶性脑缺血永久性模型(pMCAO)。假手术组仅分离颈部的血管,不进行大脑中动脉闭塞,其他手术步骤相同。蝼蛄提取物干预组于术后2h按照1m L/100g剂量(生药浓度为1g/m L)灌胃给予蝼蛄提取物,此后每天给药一次,直到各时间点结束。在相同时间点,灌胃给予假手术组和模型组等体积生理盐水。于各亚组对应时间点观察大鼠行为学表现并进行神经功能评分,采用TTC染色法测量大鼠脑梗死体积,采用HE染色法观察梗死侧脑组织病理学改变,采用免疫组织化学技术(每亚组各9只)测定大鼠梗死侧纹状体中Iba-1、Bcl-2、Bax阳性细胞表达情况。结果:1.神经功能评估:假手术组没有神经功能缺失症状,评分是0分。在各个时间点,蝼蛄提取物干预组神经功能评分较模型组显著降低,具有统计学意义(p0.05)。2.梗死体积测量:造模24小时后采用TTC染色法测量梗死体积,假手术组无梗死灶,蝼蛄提取物干预组梗死体积较模型组减小,具有统计学意义(p0.05)。3.HE染色:采用HE染色评估缺血侧纹状体病理学改变。假手术组大鼠纹状体结构未见明显异常,神经元形态正常,细胞核染色质均匀、核仁清晰,细胞浆无肿胀、皱缩;模型组大鼠缺血侧纹状体可见细胞排列紊乱,神经元胞体肿胀,细胞核固缩;与模型组相比较,蝼蛄提取物干预组细胞排列较为整齐,神经元结构基本正常,胞体肿胀程度减轻。4.免疫组化染色:(1)Iba-1蛋白表达:Iba-1标记小胶质细胞,假手术组可见少量Iba-1阳性小胶质细胞,模型组Iba-1阳性小胶质细胞数量较假手术组增多(p0.05);蝼蛄提取物干预组Iba-1阳性小胶质细胞数量较模型组减少,具有统计学意义(p0.05)。(2)Bcl-2蛋白表达:Bcl-2是抗凋亡蛋白,表达于线粒体外膜、细胞核膜、内质网膜。假手术组可见少量表达;模型组Bcl-2的表达随着缺血时间延长呈下降趋势;与模型组相比,蝼蛄提取物干预组Bcl-2阳性细胞数在各个时间点均高于模型组,具有统计学意义(p0.05)。(3)Bax蛋白表达:Bax是促凋亡蛋白,表达于细胞质和线粒体膜。假手术组可见少量表达;模型组Bax蛋白表达在1d开始升高,第3d时出现大量表达,第7d时开始下降;与模型组相比,蝼蛄提取物干预组阳性细胞数在各个时间点均低于模型组,具有统计学意义(p0.05)。结论:脑缺血后,炎症反应和凋亡在脑缺血性损伤中扮演重要角色。小胶质细胞是炎性反应最活跃的细胞之一,可诱发一系列炎症反应。Bcl-2家族蛋白包括Bcl-2、Bax等在细胞内凋亡信号转导方面发挥关键作用。中药制剂蝼蛄提取物不仅可抑制小胶质细胞的增殖,减轻炎症反应所致损害,还可以通过调控内源性凋亡途径,促进了抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,抑制了粗凋亡蛋白Bax的表达,降低梗死区的细胞凋亡,促进细胞的存活,降低梗死体积,恢复神经功能,从而对受损脑组织起到保护作用。
【图文】：

神经功能障碍症状，评分为 0 分。模型组：神经功能障碍评分随缺降低趋势。药物干预组：使用蝼蛄提取物干预后，与模型组相比，分在各个时间点降低显著，具有统计学意义（p<0.05）。结果提示：，使用蝼蛄提取物干预后，可显著改善大鼠的神经功能障碍程度（见）。表 2-1 各组大鼠神经功能评分（ ）组别 1d 3d 7d假手术组 0 0 0模型组 2.53±0.53 2.27±0.61 2.05±0.45蝼蛄提取物干预组1.61±0.5* 1.50±0.50* 1.33±0.56*注：与模型组相比，*p<0.05；x±S模型组

山西医科大学硕士学位论文染色均匀呈红色，未见白色梗死灶；模型组和区染为红色，梗死区呈白色，与模型组相比，，小，提示脑梗死体积明显减小(P<0.05)。（见下
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

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本文编号：2597672