补肾益智方提取部位对IBO痴呆大鼠神经保护作用及机制研究

发布时间：2020-03-24 20:10

【摘要】：背景:阿尔茨海默病(Alzheimer' s Disease,AD)是一种进行性神经变性疾病,其特征在于记忆丧失,多重认知障碍以及个性和行为的变化。阿尔茨海默病是最常见的痴呆形式,占所有病例的约60-80%。世界卫生组织(WHO)和阿尔茨海默病疾病国际(ADI)估计医疗费用的老年人将继续增加,而且诊断的痴呆症病例数量将在2050年增加三倍。年龄相关的神经变性疾病,如AD和痴呆,是当今社会最大的挑战之一。补肾益智方是由本科室赖世隆教授所创立,前期的实验及临床研究数据表明,该方不仅能够缓解痴呆患者的临床症状,且能保护多种痴呆动物模型的学习记忆功能。其保护作用机制主要表现为抗Aβ的毒性作用、抑制神经元细胞Ca2+内流、抗氧化应激及抗细胞凋亡等,具有较大的研究价值。但是中药复方成分较为复杂,其主要有效药物成分难以说明,因而本研究所对该方进行了深入的研究,对全方水煎液进行提取,其中乙酰乙酯提取部位具有明显的促进细胞增殖及抗Aβ毒性作用。在此基础上,我们开展了补肾益智方其提取部位对IBO致痴呆大鼠模型影响的实验研究。目的:探讨补肾益智方有效提取部位三号药(BSYZ-E)对IBO致痴呆大鼠模型的学习记忆能力及其保护作用,期望帮助找到治疗AD的理想方法,为该方的进一步开发及临床使用提供更有效的实验证据。本次实验的重点在于研究补肾益智方有效提取部位三号药能否通过减弱IBO诱导大鼠海马的兴奋性毒性来改善老年性痴呆的症状及病理改变。方法:3月龄SPF级SD大鼠把动物按性别分层随机分成6个组,分别是空白对照组、模型组、阳性药组(多奈哌齐)、BSYZ-E低剂量组、BSYZ-E中剂量组、BSYZ-E高剂量组。雌雄各半,给予相应药液灌胃4周。行为学采用Morris水迷宫、条件恐惧实验检测各组大鼠空间学习记忆能力。HE染色方法检测大鼠海马病理改变;比色法检测大鼠海马乙酰胆碱酯酶(AchE)、乙酰胆碱转移酶(ChAT)活力;western-blot法及qPCR 法检测海马 BDNF、GDNF、NGF、SYT、SYP、PSD95、TrkA、TrkB、TrkC 及 ERK1/2的mRNA及蛋白表达水平。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠海马BDNF水平。数据采用SPSS17.0统计分析软件进行统计分析,Morris水迷宫定位航行实验的逃避潜伏期采用重复测量方差分析。其余实验数据采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD检验,P0.05差异有统计学意义。结果:1.行为学测试包括Morris水迷宫和条件恐惧实验(1)Morris水迷宫行为学结果在BSYZ-E治疗IBO致痴呆大鼠的实验中,模型组与对照组大鼠相比,定位航行试验的逃避潜伏期延长(P0.01),空间探索试验在目标象限停留时间缩短、跨越平台次数亦减少。(2)条件恐惧实验结果在BSYZ-E治疗IBO致痴呆大鼠的实验中,模型组与对照组大鼠相比,模型组凝滞时间明显较短(P0.05)。与模型组相比,阳性药多奈哌齐组、BSYZ低、高剂量组凝滞时间明显较长(P0.05);BSYZ中剂量组凝滞时间有延长趋势,但差异无统计学意义(P0.05)2.HE染色法检测结果说明BSYZ-E及阳性药(多奈哌齐)对IBO致痴呆大鼠脑内神经元有一定程度的保护作用。3.比色法检测结果显示,BSYZ-E可以降低IB0大鼠海马中AChE活性,提高IBO大鼠海马中ChAT活性。4.Western-blot法检测结果显示,BSYZ-E可以提高IBO大鼠海马中BDNF、NGF、SYT、SYP、PSD95、TrkA、TrkB 及 ERK1/2、pCREB 的蛋白表达水平。5.qPCR法检测结果显示,BSYZ-E可以提高IBO大鼠中海马BDNF、GDNF、NGF、SYT、SYP、PSD95、TrkA、TrkB、TrkC 及 ERK1/2 的 mRNA 表达水平。6.ELISA试剂盒检测结果显示,BSYZ-E可以明显增加IBO大鼠海马中BDNF含量。结论:水迷宫测试和条件恐惧实验结果提示BSYZ-E均可以在一定程度上改善IBO大鼠的学习记忆能力。BSYZ-E可以通过提高IBO大鼠海马中BDNF、NGF、pCREB、SYT、SYP、PS095、TrkA、TrkB及ERK1/2的的表达,进而改善IBO大鼠的学习记忆能力。BSYZ-E改善大鼠学习记忆障碍的作用机制可能与激活BDNF/Erk/CREB信号通路,改善胆碱能系统酶活性、减少神经元损伤、改善突触结构域相关。从实验结果中可以发现BSYZ-E对老年痴呆有一定的治疗作用,值得进行深一步研究。
【图文】：

对照组,水迷宫,硕士学位论文,组间

广州中医药大学２０１７届硕士学位论文逦逦逡逑表２邋Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫定位航行逃避潜伏期（Ｉ±ｓ）逦逡逑别（ｎ）逦第１天邋第２天邋第３天逦第４天逦第５天逡逑组（２０）逦４４．邋７２士２．邋９５逦３７．邋３２土３．邋８１逦２０．邋７８±２．逦７６逦１７．逦７６土２．逦３７逦１４．逦０２士邋１．邋７２逡逑组（２０）邋＃＃逦５７．邋７７士０．８９逦５７．邋６土０．邋８９逦５７．邋３６士邋１．逦０３逦５８．逦８９土０．逦３２逦５６．逦１０士邋１．邋５２逡逑组（１８）逦＊＊逦４９．邋７３土２．邋９４逦４５．逦６１土３．邋７６逦４０．邋２２士４．邋３８逦４３．逦２１±３．逦７７逦３９．邋９８土４．逦０８逡逑组（１９）逦＊＊逦４８．邋７１邋士３．邋６７逦４６．逦０５士４．邋０２逦３４．邋８５士４．邋２３逦３６．邋５８土４．邋１４逦３５．邋６９土４．逦６７逡逑组（１９）逦＊＊逦４７．邋１１邋土３．邋２９逦４９．逦８９士２．邋３１逦４８．邋００土３．邋２０逦３６．邋５２土３．邋２９逦４１．邋２１±３．逦９２逡逑组（１９）逦＊＊逦５２．邋４２±１．邋８４逦５３．逦３８士邋１．邋８１逦４６．邋５２士２．邋４１逦４８．逦６８±３．逦０６逦４１．邋４４土３．逦８２逡逑对照组比较，，酣＂＜0．0１；与模型组比较，＊＊户＜０．０１１逡逑

台位,次数,大鼠,空间探索

组：ｈｉｇｈ－ｄｏｓｅ）逡逑２．空间探索试验逡逑空间探索站台穿越次数结果显示，表３、图３表示大鼠在原平台穿越次数的组间逡逑比较。与对照组相比，模型组在原平台穿越次数较多，差异无统计学意义（Ｐ＞0．0５）；逡逑与模型组相比，阳性药多奈哌齐组、ＢＳＹＺ＿Ｅ低、中、高剂量组在原平台穿越次数较多’逡逑但差异无统计学意义（Ｐ＞0．0５）。逡逑表４、图４表示大鼠原平台象限停留时间的组间比较。与对照组相比，模型组在逡逑原平台象限停留时间较少，差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）；与模型组相比，阳性药多逡逑奈哌齐组、ＢＳＹ－Ｅ低、中、高剂量组原平台象限停留时间较多
【学位授予单位】：广州中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

【参考文献】