知母多糖的分离纯化与结构分析

发布时间：2020-03-25 05:36

【摘要】：知母(Anemarrhena asphodeloides Bge.)是百合科知母属中药,具有清热泄火,滋阴润燥的功效。多糖是知母的主要活性成分之一,具有降血糖、抗炎、增强免疫等功能。目前对知母多糖的研究主要集中在药理活性方面,对其结构特征的研究报道较少。为了更好地研究知母多糖的构效关系,有必要深入分析其组成与结构。因此,我们设计了本论文的研究内容,具体的研究结果如下:利用热水煮提、乙醇醇沉等方法得到知母多糖WABP,得率为8.2%。WABP的糖含量为55.2%,糖醛酸含量为19.2%,蛋白质含量为0.8%,经完全酸水解及HPLC分析可知WABP的主要单糖组成及其所占的摩尔比为Man:GalA:Glc:Ara:Gal=32.3:23.6:14.1:14.1:11.2。将WABP利用DEAE-纤维素离子交换柱层析分级,分别用蒸馏水及0.5 M NaCl水溶液洗脱,得到中性糖级分WABP-N和酸性糖级分WABP-A,得率分别为54.3%和21.7%。进一步将WABP-A利用离子交换柱层析分级,采用不同浓度的盐溶液洗脱,得到WABPAH、WABP-A2、WABP-A3和WABP-A5四个级分,其中WABP-A2和WABP-A3为主要级分,得率分别为56.6%和30.3%。WABP-A2经Sepharose CL-6B凝胶柱层析分级得到WABP-A2a,WABP-A2b和WABP-A2c三个均一级分,WABP-A3经Sepharose CL-6B凝胶柱层析分级得到WABP-A3a和WABP-A3b两个均一级分。对均一级分WABP-A2a、WABP-A2b和WABP-A3a进行单糖组成测定、红外光谱、甲基化以及核磁共振分析,结果表明这三个级分均为I型聚鼠李半乳糖醛酸(RG-I)果胶结构域,以α-1,4-GalpA和α-1,2-Rhap连接构成主链,侧链连有高度分支的阿拉伯聚糖和I型阿拉伯半乳聚糖(AG-I),此外WABP-A2b的侧链中还含有少量的II型阿拉伯半乳聚糖(AG-II)。对另外两种均一级分WABP-A2c和WABP-A3b进行单糖组成测定,结果显示二者主要由GalA构成,含量分别为79.2%和72.7%。红外光谱及核磁共振分析结果表明,WABP-A2c和WABP-A3b主要为α-1,4-GalpA连接构成的聚半乳糖醛酸(HG)结构域,部分GalA发生甲酯化和乙酰化修饰。果胶酶酶解实验表明WABP-A2c和WABP-A3b中除HG结构域外,还含有少量RG-I和II型聚鼠李半乳糖醛酸(RG-II)结构域,不同的结构域可能通过共价键连接。本论文对知母多糖的结构进行了详细研究,知母酸性糖中含有HG型、RG-I型、RG-II型和AG型果胶,AG型果胶作为RG-I型果胶侧链存在,各种类型果胶共价连接为果胶大分子,研究结果为知母多糖的药理活性及构效研究提供了结构基础。
【图文】：

图 1-2 RG-I 型果胶结构示意图[4]果胶通常存在于植物壁中，由至少 8 个 1,4-连接的 α-D式和类型均不同的糖残基组成侧链（A-D），结构示意图如鉴定了 RG-II 型果胶的不同结构亚基，但是主链上连接支点以及它们的空间取向仍然是科学家应对的巨大挑战不仅是最复杂的而且是最保守的细胞壁多糖，对正常的

图 1-2 RG-I 型果胶结构示意图[4]（2）RG-II 型果胶通常存在于植物壁中，由至少 8 个 1,4-连接的 α-D-GalpA 残基组架，由连接方式和类型均不同的糖残基组成侧链（A-D），结构示意图如图 1-3 所示。现在几乎完全鉴定了 RG-II 型果胶的不同结构亚基，但是主链上连接的 A 和 C 侧相对位置和分支点以及它们的空间取向仍然是科学家应对的巨大挑战[5]。目前研究 RG-II 型果胶不仅是最复杂的而且是最保守的细胞壁多糖，对正常的植物生长和发关重要。
【学位授予单位】：东北师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R284

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本文编号：2599478