独活寄生汤对兔退变腰椎间盘中Ⅱ型胶原及MMP-13表达的影响

发布时间：2020-03-25 07:56

【摘要】：目的:观察独活寄生汤对大白兔退变腰椎间盘髓核及终板的组织形态学变化,并检测髓核中MMP-13蛋白含量的变化及Ⅱ型胶原蛋白m RNA的表达量,从分子学研究独活寄生汤可能产生的作用机制,明确独活寄生汤能够延缓椎间盘退变,为今后临床上遣方用药提供实验基础,促进祖国医学的多元化发展。方法:选取成年健康新西兰大白兔80只,随机分为空白对照组、假手术组、模型对照组、中药组以及高浓度中药组,各组为16只大白兔。除空白对照组和假手术组外,其余各组按照纤维环穿刺法建立兔腰椎退变模型,造模成功后依据人与动物表面积换算公式计算出实验兔所需药物剂量,空白对照组、假手术组与模型对照组每日生理盐水灌胃,中药组及高浓度中药组分别用低浓度及高浓度独活寄生汤每日灌胃,整个灌胃过程持续8周。所有大白兔正常饲养,每隔1周称量大白兔体重,根据体重变化调整灌胃剂量。分别于造模后2周、灌胃4周后、灌胃6周后、灌胃8周后每组随机抽取大白兔各4只处死取材,运用HE染色400倍光镜下观察椎间盘组织形态学变化;用RT-PCR法检测髓核中胶原蛋白(COL-2a)基因表达量;Western Blot检测髓核中MMP-13的蛋白含量。结果:RT-PCR及Western Blot检测结果表明:空白组与假手术组中COL-2a m RNA及MMP-13蛋白表达差异无统计学意义(P0.05);模型对照组椎间盘中COL-2a m RNA及MMP-13蛋白含量高于空白组和假手术组,其差异具有统计学意义(P0.05),说明造模成功;中药组、高浓度中药组COL-2a m RNA及MMP-13蛋白含量均要低于模型对照组,其差异具有统计学意义(P0.05),说明独活寄生汤汤能有效延缓兔椎间盘退变;中药组与高浓度中药组中COL-2a m RNA及MMP-13蛋白表达差异无统计学意义(P0.05),说明中药浓度的高低对延缓兔椎间盘退变无明显差异。结论:1、肌间隙入路纤维环穿刺法可成功造成兔椎间盘退变模型;2、退变的兔椎间盘组织结构及病理变化与人退变椎间盘相吻合,纤维环穿刺,即外界物理刺激因素可使椎间盘的退变速度加快,能功能模仿椎间盘退变的动物模型;3、对腰椎间盘退变的大白兔予以独活寄生汤汤灌胃后,椎间盘组织中MMP-13蛋白表达水平明显降低,同时,Ⅱ型胶原的基因表达明显升高,证明独活寄生汤汤可能具有抑制MMP-13蛋白酶的活性,使椎间盘髓核内的关键蛋白(Ⅱ型胶原蛋白)的表达升高,从而达到延缓椎间盘退变的作用。
【图文】：

溶解曲线,椎间盘,曲线图,椎间盘退变

18COL2a-溶解曲线图4 兔椎间盘中 MMP-13的检测4.1 各组兔椎间盘中 MMP-13 相对蛋白表达水平造模后 2 周：空白对照组与假手术组对比，MMP-13 水平差异不明显（P >0.05），差异不具有统计学意义，说明手术不是造成兔椎间盘退变的外在因素；与空白对照组相比，模型对照组、中药组及高浓度中药组 MMP-13 水平明显上升(P<0.05)，说明纤维环穿刺法能造出兔椎间盘退变模型；灌胃 4 周、6周及 8 周后：与模型对照组相比，，中药组及高浓度中药组 MMP-13 水平有所下降（P<0.05），说明独活寄生汤灌胃能抑制盘内 MMP-13 的合成，从而抑制或减缓椎间盘退变；与中药组相比
【学位授予单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

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