化瘀通脉颗粒质量和初步药效学研究

发布时间：2020-03-26 03:13

【摘要】：化瘀通脉颗粒是一种医疗机构制剂,具有活血化瘀的功效,临床上用于皮肤血管炎的治疗。该制剂处方包括丹参、毛冬青、赤芍、桃仁和川芎等多种药材,其中丹参和毛冬青为君药,可以活血通络、清热解毒。如同大多数医疗机构制剂,化瘀通脉颗粒药学研究并不完善。因此本课题通过相关质量研究,以提高该制剂质量标准;同时进行初步药效学研究,评价化瘀通脉颗粒的药理作用,为化瘀通脉颗粒的临床应用提供理论依据。实验方法:(1)建立毛冬青皂苷甲和冬青素A含量测定的高效液相色谱法(HPLC),并同时检测市售9批药材和化瘀通脉颗粒及其中间产品中三萜皂苷的含量;建立HPLC同时测定化瘀通脉颗粒中指标成分丹酚酸B和芍药苷含量的方法,并测定3批化瘀通脉颗粒中有效成分的含量;通过对化瘀通脉颗粒指纹图谱的研究,对该制剂进行总体重评价。(2)进行最大给药量的急性毒性试验,根据试验结果初步评价化瘀通脉颗粒的安全性;采用小鼠耳肿胀动物模型,考察化瘀通脉颗粒的抗炎作用;基于小鼠凝血时间和出血时间,评价化瘀通脉颗粒的抗凝作用。实验结果:本实验采用HPLC法能准确、稳定的对毛冬青皂苷甲和冬青素A进行含量测定,通过检测后发现9批毛冬青药材中三萜皂苷含量差异较大,化瘀通脉颗粒及中间产品中的三萜皂苷含量低;本实验成功建立了同时测定化瘀通脉颗粒中丹酚酸B和芍药苷的含量测定方法,该方法线性关系良好,稳定性、重复性和精密度RSD均小于2%;通过对化瘀通脉颗粒HPLC指纹图谱研究,发现化瘀通脉颗粒各批次间质量略有差异。急性毒性试验结果表明化瘀通脉颗粒的安全范围较大,无明显毒理反应;药理试验中发现高剂量的化瘀通脉颗粒可以降低小鼠耳肿胀率,低、中、高剂量的化瘀通脉颗粒均可以延长小鼠的出血时间和凝血时间。实验结论:本文成功建立了毛冬青中三萜皂苷、化瘀通脉颗粒中有效成分的含量测定方法,并建立该制剂的指纹图谱,全面反映和评价化瘀通脉颗粒的质量水平,研究结果可用于提升制剂的质量标准,加强对化瘀通脉颗粒的质量控制。通过动物实验发现化瘀通脉颗粒安全性高,有抗炎作用和抗凝作用,为临床使用提供了参考。
【图文】：

HPLC色谱,毛冬青,药材,溶液

在本次研究中，采用 HPLC 对药材毛冬青中的毛冬青皂苷甲和冬青素 A 进行含量测定的色谱条件为：色谱柱 DiKMA Diamonsil plus (5 μm C18，250 mm×4.6mm)；流动相：乙腈-0.05%磷酸水溶液，梯度洗脱如表 2-1 所示；检测波长 210 nm；流速为 1.0 mL/min；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。2.1.4 方法学2.1.4.1 专属性考察取毛冬青药材按 2.1.2.2 制备供试品溶液，，将混合对照溶液加入制备好后的供试品溶液中，按 2.1.3.3 中色谱条件对供试品溶液及含对照样品溶液进行检测。结果如图 2-1 和图 2-2 所示，含有对照样品溶液色谱图中毛冬青皂苷甲和冬青素 A 的色谱峰与供试品溶液基本一致，且两个溶液中的待测组份光谱图一致，这表明该方法能够准确识别选择毛冬青皂苷甲和冬青素 A，具有良好的专属性。

HPLC色谱,毛冬青,混合溶液,药材

图 2-2 毛冬青药材与对照品混合溶液 HPLC 色谱图2.1.4.2 线性关系的考察取 2.1.2.1 中的对照品储备液配制毛冬青皂苷甲浓度 0.493 mg/mL、0.19mg/mL、0.099 mg/mL、0.049 mg/mL、0.025 mg/mL 和冬青素 A 浓度 0.497 mg/mL、0.199 mg/mL、0.099 mg/mL、0.050 mg/mL、0.025 mg/mL 的系列混合溶液，按 2.1.3中色谱条件进行测定，绘制标准曲线，如图 2-3 和图 2-4 所示，计算得出线性方程。毛冬青皂苷甲的线性方程为：Y=1.66×106X + 1.17×104，R2=0.9993。冬青素 A 的线性方程为：Y=3.74×106X +1.74×104，R2=0.9998。线性关系考察结果表明毛冬青皂苷甲在 0.025 mg/mL 至 0.493 mg/mL 的浓度范围内有良好的线性关系，冬青素在 0.025 mg/mL 至 0.497 mg/mL 的浓度范围内有良好的线性关系。600000700000800000900000
【学位授予单位】：电子科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R286.0;R285.1;R-332

【参考文献】