双丹脂质体凝胶剂的制备及抗增生性瘢痕研究

发布时间：2020-03-26 02:20

【摘要】：增生性瘢痕是烧伤、术后和外伤后的常见疾病,严重者会影响体表美观并导致患者的机体功能障碍和心理障碍。现代治疗增生性瘢痕多用激素、激光、冷冻、手术等治疗方法,往往伴随副作用。中医药对瘢痕的防治有久远的历史,但存在用药途径比较单一、剂型有限等诸多问题,若将传统中药开发成现代制剂,可为中药应用于瘢痕治疗提供一种新思路。瘢痕即为中医的“血瘀症”,临床治疗多采用活血化瘀、通络散结之品。由丹参和牡丹皮两味中药组成的“双丹方”是活血化瘀的经典药方,可对增生性瘢痕对症治疗。本课题设计将双丹方的主要有效成分丹参酮ⅡA、丹参素、丹皮酚这三种能抑制增生性瘢痕的有效单体制成一种新的复方制剂,即双丹脂质体凝胶剂(SD-Lip Gels),为临床上中药瘢痕成方制剂的研制做新的尝试。目的研制SD-Lip Gels,优化处方和制备工艺,考察其体外透皮特性,并进行双丹脂质体凝胶剂的抗兔耳增生性瘢痕作用和经皮药动学考察。方法(1)进行处方前研究,包括药物的理化性质考察,建立DSS、DPF、DST含量测定方法和脂质体的包封率测定方法。(2)采用乙醇注入法制备双丹脂质体(SD-Lips),分别以脂药质量比(X_1)、卵磷脂与胆固醇质量比(X_2)、卵磷脂与十八胺质量比(X_3)、水化温度(X_4)为自变量,以丹参素包封率(Y_1)、丹皮酚包封率(Y_2)、丹参酮ⅡA包封率(Y_3)为考察指标,采用Box-Behnken效应面法优化制备工艺,制备SD-Lip Gels。(3)考察SD-Lip Gels的理化性质及质量,包括粒径、Zeta电位、pH值、粘度、含量以及在高温和强光条件下的稳定性,进行体外透皮考察,模型拟合数据,比较SD-Lip Gels和普通凝胶剂(SD-Gels)中药物的透皮速率、皮肤滞留量、凝胶层残留量,并绘制体外渗透曲线。(4)建立兔耳增生性瘢痕模型,建模21d后开始给药,持续42d,采集瘢痕组织标本进行HE染色,进行组织学观察,并测量瘢痕增生指数HI和成纤维细胞密度NA。采集兔血分离血清,进行TGF-β1、IL-1β含量测定。(5)利用微透析技术进行经皮药动学研究,用增量法和减量法进行探针体外回收率试验,考察不同灌流速度、不同药物浓度对探针回收率的影响,进行探针体内回收率的校正和SD-Lip Gels和SD-Gels的经皮药动学研究,绘制皮下药物浓度时间曲线,比较两种剂型的药动学参数。结果(1)建立了HPLC含量测定方法和包封率测定方法。(2)SD-Lips的最优制备工艺为X_1=13.8,X_2=4.6,X_3=13.3,X_4=50℃;DSS包封率为(30.62±2.17)%,DPF包封率为(51.16±2.54)%,DST包封率为(80.47±3.24)%,SD-Lips平均粒径240.8nm,分散均匀,Zeta电位+16.2mV。(3)SD-Lip Gels的pH值为6.48~6.62、粘度为23.9~24.8Pa·s,总药物含量为2.12mg/g,遇高温和强光不稳定,需避光常温或低温贮藏。SD-Lip Gels透皮速率与SD-Gels比较有所降低,凝胶层残留量较低,皮肤滞留量明显增加。(4)与模型组相比,SD-Lip Gels组瘢痕的成纤维细胞细长呈梭形、细长、疏松有序排列,且成纤维细胞密度明显降低,差异有统计学意义(P0.05);治疗后,兔血清TGF-β1、IL-1β含量与治疗前比较均有显著变化,与模型组及治疗前比较,差异有统计学意义(P0.05)。(5)比较SD-Lip Gels与SD-Gels的药代动力学参数,两种制剂的Tmax均接近1h,且SD-Gels的Cmax均高于SD-Lip Gels,SD-Lip Gels的半衰期t1/2、滞留期MRT、以及AUC面积比SD-Gels有所提升。SD-Lip Gels在药物达到峰值后能长时间持续稳定的释放药物,药物滞留时间比SD-Gels长,药物总透皮量显著高于SDGels。结论采用Box-Behnken效应面法优化SD-Lip Gels制备工艺具有可行性,SDLip Gels具有缓释作用,长效且能提高药物透皮总量和皮肤蓄积量,减少全身吸收。SD-Lip Gels对兔耳增生性瘢痕有良好的治疗效果,其作用机制可能通过调节TGF-β1、IL-1β的表达来抑制瘢痕生成。
【图文】：

瘢痕形成,机制

仅影响体表美观，还可能导致机体功能障碍和影响患者的心恢复是一个漫长的过程，一般需要几月甚至几年才会逐渐发红转暗，充血消退，突起部分趋于平缓，触感变软。痕是创伤后皮肤组织过度修复，成纤维细胞异常活跃，使Ⅰ型导致胶原的合成与降解失调，在皮肤真皮层过度聚集的结果性瘢痕形成的因素主要有[3,4]：（1）个体因素，跟遗传、机体压等疾病均可能相关。生活中所谓的疤痕体质便与遗传有着胞异常，成纤维细胞是创面修复的重要细胞，成纤维细胞的活原异常，与增生性瘢痕的形成有着直接联系。（3）细胞因子β、白细胞介素因子、整合素、胰岛素样因子、血小板衍生生胞通路来影响增生性瘢痕的形成。细胞因子可作为治疗增生，是近年来的研究热点。

色谱图,系统适应性,专属性,色谱图

17~30 90 1030~35 20 80液的制备品溶液：将 SD-Lip Gels 处方的原料药和各辅料按比例混匀，取 0.1gmL 容量瓶中，5mL 甲醇超声溶解并加蒸馏水稀释至刻度，即得；对照溶液：取各辅料混合物 0.1g，制备方法同供试品溶液，即得；品溶液：浓度分别为 42.500，10.455，10.835μg/mL 的 DSS、DPF、D液。统适应性和专属性考察吸取供试品溶液、空白对照溶液、对照品溶液，色谱进样分析，结果得ST 色谱峰拖尾因子在 0.95~1.05 之间，分离度大于 1.5，，理论塔板数均明在该色谱条件下 DSS、DPF、DST 峰型稳定，与杂峰分离度良好，峰影响，见图 2-1。
【学位授予单位】：广东药科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R283.6;R285.5

【参考文献】