火麻仁苯丙酰胺类化合物抗炎活性研究及吸收代谢特征初探

发布时间：2020-03-26 01:48

【摘要】：火麻仁(hempseed)是桑科植物大麻(Cannabis sativa L.)的干燥成熟种子,其主要成分包括脂肪酸及其酯类,蛋白类,纤维素,大麻素类,苯丙酰胺类,甾体及萜类,黄酮及其苷类,生物碱等。现代药理研究表明,火麻仁提取物具有抗炎、抗氧化、抗高血压等多种药理活性,在抗衰老、治疗阿尔茨海默症(Alzheimer's disease,AD)方面具有潜力。本课题组前期研究也发现,苯丙酰胺类总提取物能够改善脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)神经炎症模型小鼠的学习记忆损伤,本文将采用LPS刺激小胶质细胞模型筛选火麻仁苯丙酰胺类化合物抗炎活性,并对活性化合物进行初步的机制研究。另一方面,目前对火麻仁苯丙酰胺类化合物的代谢情况研究较少,而该类化合物可能是起药理活性的重要部分。因此,本论文也初步探究了两个火麻仁含量较高的代表性苯丙酰胺类化合物体外代谢特征。利用LPS刺激的BV2小胶质细胞模拟神经炎症模型,活性筛选发现苯丙酰胺类化合物,尤其是化合物coumaroylaminobutanol glucopyranoside(CLG)抗炎活性较好。进一步研究发现CLG能够降低LPS诱导的BV2细胞中炎症因子的产生及mRNA水平的表达,降低ROS的水平,能够通过AMPK调控的TLR4/MyD88/NF-κB炎症通路及Nrf-2/HO-1抗氧化通路来抑制LPS刺激产生的神经炎症反应及氧化应激反应。以上实验说明CLG有治疗神经炎症相关疾病的潜力。另一方面,本论文使用多种体外代谢方法初步研究了火麻仁中CannabisinA(CA)和N-trans-caffeoyltyramine(NC)的体外代谢特征。(1)体外模拟胃肠道消化实验发现,它们在胃肠道中的生物可利用度较低;(2)成功建立了caco-2细胞单层模型(细胞形态观察,跨膜电阻测定、荧光素钠渗漏实验、碱性磷酸酶活性均验证了该模型的成功),发现CA和NC均属于难吸收的化合物,且存在外排现象;(3)肝微粒体体外孵育实验得到CA和NC两个化合物的代谢参数:t1/2(CA)=1.52min,CL=0.76 mL min-1mg-1;t1/2(NC)=2.35 min,CL=1.175 mL min-1·mg-1,说明CA和NC在肝微粒体中都不稳定,CA的消除速度比NC快;(4)肠道菌群体外孵育发现CA和NC在肠道菌群的作用下不稳定,NC在24h内基本代谢完毕,CA则在24 h内减少了87%。以上实验说明:以CA和NC为代表的火麻仁苯丙酰胺类化合物口服吸收生物利用度较低,该类化合物的主要代谢部位可能是在肠道,肠道菌群作用很重要,需要进一步研究,以阐明火麻仁体内药理活性物质基础。
【图文】：

模型图,炎症反应,模型,异常沉积

是ＡＤ病理进程中重要致病因素，与其他机制相互联系，共同损伤神经系统，参逡逑与了邋ＡＤ发生发展的各个阶段。逡逑炎症反应参与ＡＤ的大致过程如图１－１：老年人大脑内ＡＰ的异常沉积是引逡逑起炎症的诱发因素，，通过激活神经胶质细胞、炎症因子和神经毒素等一系列免逡逑疫反应，造成Ａｐ积聚、ｔａｕ过度磷酸化，促使神经细胞的损伤和死亡。凋亡的逡逑８逡逑

小胶质细胞,亚型

小胶质细胞最先作出反应。活化的小胶质细胞形态发生改变，分枝回缩，逡逑胞体相对变大，呈阿米巴虫样［３２］。活化的小胶质细胞可分为Ｍｌ型（经典激活，逡逑促炎型）和Ｍ２型（选择性激活，抗炎型）（见图１－２）邋［２３，３３］。逡逑Ｄｅｆｅｎｓｅ邋ａｇａｉｎｓｔ逦Ｐｒｎｍｎｔｐ＾邋ｔｉｓ＾ｕｐ逡逑ｐａｔｈｏｇｅｎｓ邋ａｎｄ邋Ｌｏｓｓ邋ｏｆ邋ｎｅｕｒｏｎｓ邋咖0加丨丨ｎｇ／ｒｅｐａｉｒ逦Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ逡逑＂Ｔｕｍｏｒ邋ｃ＆ｌｌ逡逑ＳＴＡＴ３．邋ＩＬ－６，邋ＩＬ－１２．逦Ｔ？Ｆ－邋ａｎ？邋ｌｏｗ邋ｌｅｖｅｌｓ逡逑Ｒ0Ｓ逦ｏｆ邋ｐｒｏ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ逡逑ｃｙｔｏｋｉｎｓｅ逡逑ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ逦Ｍ２逡逑ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ逡逑ＡＤ逡逑图１－２小胶质细胞不同亚型在ＡＤ中的作用［２３】逡逑Ｍ２表型小胶质细胞能够分泌白细胞介素－４邋（ＩＬ－４）、ＩＬ－１０、ＩＬ－１３、转化生长逡逑因子（ＴＧＦ）、神经营养因子如胰岛素样生长因子－１邋（ＩＧＦ－１）、脑源性神经营养因逡逑子（ＢＤＮＦ）等［３４］，达到保护神经元的作用。然而，持续激活的小胶质细胞不但逡逑１０逡逑
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

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