基于BDNF-Trkb通路探讨头顶一颗珠对衰老大鼠认知功能的影响

发布时间：2020-03-26 08:09

【摘要】：目的:通过皮下注射D-半乳糖(D-Galactose,D-gal)建立大鼠衰老模型,采用头顶一颗珠(Trillium tschonoskii Maxim,TTM)的提取物进行处理,观察BDNF-Trkb通路相关蛋白的改变,探讨头顶一颗珠对衰老大鼠认知能力的影响及可能的机制。方法:60只雄性SD大鼠随机分为5组:对照组(Control)、模型组(D-gal)、TTM低剂量组(D-gal+50 mg/kg TTM)、TTM中剂量组(D-gal+100 mg/kg TTM)、TTM高剂量组(D-gal+200 mg/kg TTM)。除对照组外,其余各组大鼠每天颈背部皮下注射100 mg/kg的D-gal,对照组大鼠每天颈背部皮下注射相同剂量生理盐水;TTM各剂量组大鼠每天同时用对应浓度TTM提取物灌胃,连续42天。第6周开始用Morris水迷宫检测大鼠学习和空间记忆能力;灌流取材后用HE染色检测海马组织的形态;用免疫荧光分析海马组织内8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2-deoxyguanosine,8-OHDG)的表达;用免疫印迹(Western Blot)检测脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、酪氨酸激酶B(Tyrosine kinase B,Trkb)及P-Trkb表达的情况;用硫代巴比妥酸法测定MDA含量,用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性。结果:1大鼠空间学习记忆能力检测(1)水迷宫定位航行实验结果提示:与对照组相比,模型组大鼠逃避潜伏期时间明显延长(P0.01),且行动路线杂乱无章,趋向性差;与模型组相比,TTM各干预组逃避潜伏期时间显著缩短(P0.05或P0.01)。(2)水迷宫空间探索实验提示:与对照组相比,模型组大鼠目标象限停留时间明显缩短(P0.01),穿越平台次数明显减少(P0.01);与模型组相比,TTM各干预组大鼠平台象限逗留时间都明显增长(P0.05或P0.01),穿越平台次数显著增加(P0.05或P0.01)。2大鼠海马组织镜下观察(1)HE染色结果显示:对照组海马神经元细胞数量较多、排列整齐紧密且形态完整,胞浆丰富,胞核饱满;模型组的神经元细胞排列散乱、疏松,较多细胞核丢失,胞核形态破裂、肿胀空泡化现象较多,而且细胞数目较正常组明显较少;与模型组相比,TTM各干预组神经细胞明显增多,神经细胞排列轻度紊乱,细胞损伤性的改变明显减轻。(2)免疫荧光结果显示:与对照组相比,模型组海马组织内8-OHDG阳性细胞数量明显增多;与模型组相比,TTM各干预组8-OHDG阳性神经元的数量均显著减少,中剂量差异性最大。3大鼠海马组织中BDNF及其受体表达情况Western Blot结果显示:与对照组相比,模型组大鼠海马组织内BDNF、Trkb及P-Trkb蛋白含量明显降低(P0.01),差异有统计学意义;与模型组相比,TTM低剂量干预组BDNF、Trkb及P-Trkb蛋白表达含量均明显增高(P0.05),差异有统计学意义;与模型组相比,TTM中剂量干预组的BDNF、Trkb表达含量显著增高(P0.05),P-Trkb蛋白表达含量也显著增高(P0.01),差异有统计学意义;与模型组相比,TTM高剂量干预组的BDNF、Trkb差异没有统计学意义,而P-Trkb蛋白表达含量显著增高(P0.05),差异有统计学意义。4大鼠海马组织SOD、MDA检测与对照组相比,模型组海马组织中SOD活性明显降低(P0.001),MDA含量明显升高(P0.001);与模型组相比,TTM低剂量组海马组织中SOD活性降低,MDA含量升高,但差异没有统计学意义;与模型组相比,TTM中剂量组海马组织中SOD活性明显升高(P0.01),MDA含量明显降低(P0.01),差异有统计学意义;与模型组相比,TTM高剂量组海马组织中SOD活性明显升高(P0.05),MDA含量明显降低(P0.05),差异有统计学意义。结论:1 TTM可以改善衰老大鼠空间学习及记忆能力。2 TTM可以提高衰老大鼠海马组织抗氧化能力。3 TTM可以减少衰老大鼠海马神经元的变性以及DNA的损伤。4 TTM可以提高衰老大鼠海马中BDNF、Trkb、P-Trkb含量的表达。
【图文】：

大鼠,运动轨迹,统计分析,统计学意义

图 2-1：每组大鼠定位航行实验中运动轨迹及统计分析：Motion trail of each group of rats in positioning navigation experiment and analysis of results*号表示与对照组相比较，* P<0.05；** P<0.01#号表示与模型组相比较，# P<0.05；## P<0.01空间探索实验去平台后，与正常对照组相比，模型组大鼠第三象限停留的时间明.01），穿越平台次数明显减少（P<0.01），差异有统计学意义；与TTM 各干预组大鼠平台象限逗留时间都明显增长（P<0.05 或 P<0台次数显著增加（P<0.05 或 P<0.01），差异有统计学意义。（见

空间探索,运动轨迹,统计分析,平台

图 2-1：每组大鼠定位航行实验中运动轨迹及统计分析Fig 2-1：Motion trail of each group of rats in positioning navigation experiment and Statisticalanalysis of results注：*号表示与对照组相比较，* P<0.05；** P<0.01#号表示与模型组相比较，# P<0.05；## P<0.013.1.2 空间探索实验撤去平台后，与正常对照组相比，模型组大鼠第三象限停留的时间明显缩短（P<0.01），穿越平台次数明显减少（P<0.01），差异有统计学意义；与模型组相比，TTM 各干预组大鼠平台象限逗留时间都明显增长（P<0.05 或 P<0.01），穿越平台次数显著增加（P<0.05 或 P<0.01），差异有统计学意义。（见图 2-2）
【学位授予单位】：湖北民族大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

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