小檗碱对EA.hy926细胞增殖、迁移的抑制及机制研究

发布时间：2020-03-26 16:04

【摘要】：背景寻找天然产物的活性成份已成为现代药物发现的途径之一。现代药理学研究发现小檗碱具有广泛的药理学作用,其作为抗肿瘤药物先导化合物的应用已被广泛报道。在前期研究中采用计算机反向虚拟筛选发现,小檗碱与肿瘤新生血管密切相关的血管内皮细胞生长因子受体2(Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2,VEGFR2)有良好的结合作用,因此推断该小檗碱具有抗肿瘤血管生成的潜能。目的探讨小檗碱对肿瘤血管生成的影响及相关机制。方法通过反向虚拟筛选寻找小檗碱潜在的靶点;分子对接实验、表面等离子体实验实验、酶活性实验和免疫印迹实验评价小檗碱与靶点之间的相互作用;MTT实验和迁移抑制实验评价小檗碱对EA.hy926细胞增殖、迁移的影响;鸡胚绒毛尿囊膜实验评价小檗碱对血管新生的抑制作用;免疫印迹实验评价小檗碱在分子水平作用于相关靶点产生的生物学效应。结果反向筛选和分子对接实验结果显示小檗碱与VEGFR2有良好的结合作用,这一结果通过表面等离子体实验和酶活性实验进一步证实;MTT实验、迁移抑制实验和鸡胚绒毛尿囊膜实验发现小檗碱能够显著抑制EA.hy926细胞增殖、迁移,并能够减少鸡胚绒毛尿囊膜表面的血管生成;此外,免疫印迹实验发现小檗碱能够通过抑制VEGFR2的活性进而阻断VEGFR2介导的Akt/mTOR/P70S6K信号通路的激活。结论小檗碱能够结合并抑制VEGFR2的活性、阻断其介导的Akt/mTOR/P70S6K信号通路的激活,进而发挥抗肿瘤血管生成作用。
【图文】：

1. 研究背景恶性肿瘤是严重影响人体健康和威胁人类生命的重要疾病之一。它已成为人类死亡的第二个原因，也是最难治疗的疾病之一。血管生成是肿瘤生长和转移的关键过程。没有血管生成，最大的肿瘤只能长到 1-2mm，很容易使用传统的化疗药物治疗[1-2]。因此，通过阻断肿瘤新生血管的生成，已成为抑制肿瘤生长的肿瘤治疗新策略[3]。1.1 肿瘤血管的特征与正常组织血管相比，肿瘤脉管系统表现出非典型的形态学特征。肿瘤血管网络的特征呈现出扩张、曲折和无组织的血管，血管不成熟和缺乏壁细胞导致渗透性不足，灌注不良和缺氧增加（图 1）[4-5]。

KDR)[17-18]。 与 RTK 家族其它成员一样均为单次跨膜蛋白，，主要包括膜外结合域、膜内酪氨酸激酶和跨膜区组成。其膜内域有蛋白酪氨酸激酶活性并ATP 结合位点和下游信号蛋白结合位点[19]。VEGFR2 酪氨酸激酶域的晶体显示该区域内的肽链折叠成 2 个蛋白小叶，2 个蛋白小叶由一段被称为绞(Hinge Region)的肽链连接，2 个蛋白小叶之间扁平的空隙为 ATP 结合位点（[20]。VEGFR2 抑制剂能够与 ATP 竞争性与 VEGFR2 结合，从而阻碍 VEGF自磷酸化，抑制酶的活性，血管生成信号通路被阻断[21]。血管内皮细胞生长与相应的 VEGFR2 结合后，会引起受体的二聚化和自身的交互磷酸化，磷酸受体会引起胞内酪氨酸残基磷酸化，非受体酪氨酸激酶同源结构-2（SH-2）与 VEGF-2 特异性结合，随后激活下游信号蛋白，从而发挥其生物学效应上述研究表明，在血管生成的信号通路中，VEGFR2 发挥着关键作用，目前越多的研究以 VEGFR2 为靶点，合成新型抗癌药物。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285

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本文编号：2601658