赶黄草配伍葛花对乙醇诱导的细胞损伤模型的研究

发布时间：2020-03-27 19:07

【摘要】：目的为了探究赶黄草和葛花配伍制备的含药血清对乙醇诱导下的L-02肝细胞的影响及其机制。方法SD大鼠50只随机分为5组,分别给予赶黄草配伍葛花1:1水煎液,2:1水煎液,1:2水煎液,生理盐水和凯西莱灌胃制备含药血清。体外培养L-02肝细胞,将其分为:空白组,模型组,赶黄草配伍葛花1:1组,2:1组,1:2组和凯西莱组。各组先加入相应的含药血清,1小时后除空白组外,其余各组均给予100 mmol/L乙醇诱导损伤24h。MTT法检测L-02细胞存活率情况,酶标仪检测各组培养液及细胞中肝酶ALT、AST、SOD、MDA的活性,筛选出对乙醇损伤肝细胞模型具有更好治疗作用的赶黄草和葛花配伍组合。real-time PCR法检测TNF-α、IL-6、Nrf2、HO-1 mRNA的表达,Western-blot法检测TNF-α,IL-6、Nrf2、HO-1蛋白的表达,从而探讨赶黄草配伍葛花组方对乙醇损伤肝细胞模型的作用机制及最佳配伍。结果1.对乙醇损伤肝细胞转氨酶活性的影响:模型组ALT、AST均显著高于空白组,给药后各治疗组值均低于模型组且具有统计学差异。但各配伍组之间的ALT、AST值相比较,未见效果最佳配伍组。2.对乙醇损伤肝细胞SOD、MDA活性的影响:模型组MDA显著高于空白组,而SOD显著低于空白组;各个给药组与模型组相比,MDA低于模型组,SOD显著高于模型组且具有统计学差异。但各组之间的SOD、MDA值相比较,未见效果更突出的配伍组。3.机制研究中,赶黄草配伍葛花组方均能显著下调乙醇损伤肝细胞模型中TNF-α和IL-6的基因和蛋白的表达,说明其具有调节体内促炎细胞因子的平衡的作用。1:2组下调TNF-α蛋白效果最好。4.机制研究中,赶黄草配伍葛花组方均能显著上调乙醇损伤肝细胞模型中Nrf2和HO-1的基因和蛋白的表达,说明其具有调节体内氧化与抗氧化平衡的作用。2:1组上调Nrf2基因效果最好。1:1组上调Nrf2蛋白效果最好。结论(1)各组赶黄草配伍葛花含药血清对乙醇诱导的肝细胞损伤有显著的治疗作用,1:1组治疗趋势稍明显。(2)赶黄草配伍葛花含药血清可通过下调TNF-α和IL-6的mRNA和蛋白表达,同时上调Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白的表达,从而降低L-02肝细胞的炎症反应和减轻氧化应激,进而发挥抗酒精性肝损伤作用,可能存在新的通路。
【图文】：

含药血清,乙醇,凯西莱,蛋白表达

图 1:含药血清对乙醇损伤 L-02 细胞中 TNF-α， IL-6 mRNA 的影响s of Drug-containing serum on expression of TNF-α，IL-6，Nrf2 and HO-1 mRNL-02 liver cells induced by Ethanolern blot 法检测 TNF-α，IL-6，Nrf2 and HO-1 蛋白的表达F-α，IL-6 蛋白的表达显示：与空白组相比，模型组 TNF-α，IL-6 蛋白表达均显著上调，有P<0.01）。与模型组相比，1:1 组、2:1 组、和凯西莱组 TNF-α，IL-6下调，有统计学差异（P<0.01）。配伍治疗组间 1:2 组下调 TNF-α 效组，见下图及表 7。

含药血清,图片,乙醇

干预剂量TNF-a I0 0.262±0.180 0.2100mmol/L 0.887±0.016* 0.812.5g/kg 0.627±0.007△0.618.75g/kg 0.669±0.047△0.518.75g/kg 0.488±0.047△0.560mg/kg 0.654±0.022△0.5<0.01；△与模型组比较 P<0.01。Western-blot 图片:a b c d e f
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285

【参考文献】