阿魏酸和黄芪甲苷不同比例配伍调节大鼠胸主动脉张力及机制的研究

发布时间：2020-03-29 23:22

【摘要】：目的:本实验通过当归、黄芪的主要代表成分阿魏酸和黄芪甲苷不同比例配伍对大鼠胸主动脉张力的影响,探讨不同状态下、不同激动剂及拮抗剂作用下阿魏酸(Ferulic acid,FA)和黄芪甲苷(AstragalosideⅣ,AS Ⅳ)配伍舒张胸主动脉血管环的机制。方法:采用离体组织灌流系统与PoWerLab数据处理系统采集等距胸主动脉环张力的变化,通过累积加药观察和对比不同浓度下阿魏酸、黄芪甲苷以及阿魏酸和黄芪甲苷不同比例配伍对大鼠胸主动脉张力的影响,选择代表性配比进行机制的研究,在静息状态下,观察阿魏酸和黄芪甲苷配比对大鼠血管环张力的影响,比较其与对照组的差异性;在高钾或PHE收缩状态下,观察阿魏酸和黄芪甲苷配比对不同激动剂所致的胸主动脉环的舒张作用;观察不同钾通道阻滞剂TEA、4-AP、Gly、BaCl_2及NOS抑制剂L-NAME、COX抑制剂Indo等抑制剂预孵血管环对阿魏酸和黄芪甲苷配比舒张血管作用的影响。结果:1.在静息状态下,FA、AS Ⅳ分别对大鼠胸主动脉张力的影响实验显示,累积加入1×10~(-4)-3×10~(-1.5)g/L浓度的FA、AS Ⅳ对基础状态下对大鼠胸主动脉无显著作用,与溶剂对照组比较无明显差异(p0.05)2.高钾状态下,FA、AS Ⅳ分别对大鼠胸主动脉张力的影响结果显示,KCl预收缩基础上累积加入阿魏酸、黄芪甲苷(1×10~(-4)-3×10~(-1.5)g/L)能浓度依赖性的舒张胸主动脉,FA对血管环的最大舒张力为73.24%±7.69%,AS Ⅳ对血管环的最大舒张力为58.36%±4.41%,与溶剂对照组舒张率23.16%±2.35%比较有显著差异(P0.001)。3.高钾状态下,FA和AS Ⅳ不同配比对胸主动脉张力的影响结果显示,在KCl预收缩血管环的基础上,累积加入FA+AS Ⅳ(1:1;1:5;1:10;5:1;10:1)(1×10~(-4)-3×10~(-1.5)g/L)不同配比能浓度依赖性的舒张大鼠胸主动脉血管环,其各配比最大舒张率分别为96.63%±4.68%、67.59%±4.85%、46.27%±5.14%、90.35%±4.74%、78.51%±5.37%。不同比例与FA、AS Ⅳ单体对比,FA单体73.24%±7.69%与1:1组,1:10组,5:1组对比差异有显著性,最大舒张率分别96.63%±4.68%、46.27%±5.14%、90.35%±4.74%;AS Ⅳ单体58.36%±4.41%与1:1组,5:1组,10:1组对比差异有显著性,最大舒张率分别为96.63%±4.68%、90.35%±4.74%、78.51%±5.37%。我们发现配比使用的作用多优于单体。因为当归补血汤中当归、黄芪的经典配伍1:5,我们以1:5 Emax为67.59%±4.85%为基准与不同配伍之间的对比,发现与1:1组,5:1组,1:10组相比差异有显著性,舒张率分别为96.63%±4.68%、90.35%±4.74%、78.51%±5.37%,结果显示这三个配比作用明显优于经典配比,但以1:1配比的舒张率最明显,所以我们进一步以1:1为代表进行机制的研究。4.基础状态下,FA+AS Ⅳ1:1对大鼠胸主动脉环张力的影响实验显示,累积加入阿魏酸和黄芪甲苷配比1:1(1×10~(-4)-3×10~(-1.5)g/L)对基础状态下对大鼠胸主动脉无显著作用,与对照组比较无明显差异(P0.05)5.PHE收缩状态下,FA+AS Ⅳ1:1对大鼠胸主动脉环血管张力的影响结果显示,FA+AS Ⅳ1:1(1×10~(-4)-3×10~(-1.5)g/L)时对PHE(1μmol/L)预收缩大鼠胸主动脉环的最大舒张率(Emax)为85.51%±6.24%,EC_(50)为2.654±0.28;对KCl(60 mmol/L)预收缩动脉环最大舒张率(Emax)为67.43%±5.07%,EC_(50)为2.198±0.33(P0.01)。结果提示阿魏酸和黄芪甲苷配比1:1舒张血管依赖于受体操作性Ca~(2+)通道(ROC)和电压依赖性Ca~(2+)通道(VDC)发挥作用。6.K~+通道阻滞剂TEA、4-AP、Gly、BaCl_2状态下,FA+AS Ⅳ1:1对大鼠胸主动脉血管环张力的影响结果显示,在KCl收缩胸主动脉环基础上,Ca~(2+)依赖K~+通道阻滞剂TEA能明显抑制FA+AS Ⅳ1:1(1×10~(-4)-3×10~(-1.5)g/L)浓度依赖性血管舒张作用,其对大鼠胸主动脉血管环E_(max)为31.7%±3.91%,与对照组相比下降了35.73%±2.08%(P0.001);电压依赖性K~+通道阻滞剂4-AP能明显减弱阿魏酸和黄芪甲苷1:1(1×10~(-4)-3×10~(-1.5)g/L)浓度依赖性胸主动脉血管的舒张作用,对大鼠胸主动脉的E_(max)为41.39%±7.41%,与对照组相比降低了25.64%±1.44%(P0.001);ATP敏感K~+通道阻滞剂Gly能抑制高钾诱导收缩的胸主动脉环作用,其E_(max)为54.92%±6.95%,与对照组相比降低了12.51%±1.25%(P0.01),其中EC_(50)为1.648±0.05;内向整流K~+通道阻滞剂BaCl_2能抑制阿魏酸和黄芪甲苷配比1:1(1×10~(-4)-3×10~(-1.5)g/L)的舒张血管E_(max)为50.25%±10.52%,与对照组相比降低了15.19%±4.55%(P0.001);其中EC_(50)为1.713±0.28。以上结果表明,FA+AS Ⅳ1:1的舒血管作用可能与K_V、K_(Ca)、K_(IR)、K_(ATP)通道开放有关。7.阻滞剂L-NAME、Indo状态下,FA+AS Ⅳ1:1对大鼠胸主动脉血管环张力的影响结果显示,在PHE(1μmol/L)预收缩的胸主动脉血管环基础上,一氧化氮合酶NOS抑制剂L-NAME和环氧合酶抑制剂Indo能够抑制黄芪甲苷和阿魏酸配比1:1对大鼠胸主动脉环的舒张作用,其Emax分别为51.86±12.07%,55.11%±6.95%,与对照组相比分别降低了29.65%±7.79%,30.4%±2.43%(P0.001),其EC_(50)分别为1.708±0.31,1.693±0.29。以上实验结果说明NO,PGI_2参与了FA+AS Ⅳ1:1的舒血管作用。结论:1.当归补血汤方的主要代表成分阿魏酸、黄芪甲苷及其不同配伍比例对血管环有不同程度的舒张作用。当配伍比例发生变化时,血管环的舒张率也在变化,即当配伍中阿魏酸或黄芪甲苷的比例逐渐增加时,血管环的舒张率反而呈现下降的趋势,说明不同的比例具有不同的舒张特点。通过与不同比例和单体的比较发现,阿魏酸和黄芪甲苷配比1:1舒张率最具代表性其舒张率最大。单体与不同配伍对比的研究中发现,不同比例配伍的血管张力多大于单体,且配伍使用具有协同增效作用。2.在阿魏酸与黄芪甲苷1:1机制的研究中,阿魏酸和黄芪甲苷1:1配比对胸主动脉血管环的舒张作用与内皮依赖性途径和非内皮依赖途径有关,NOS抑制剂L-NAME能够明显抑制阿魏酸和黄芪甲苷1:1配比的舒张胸主动脉环的作用,说明阿魏酸和黄芪甲苷1:1配比的舒血管作用与NO的参与有关。COX抑制剂Indo也能抑制阿魏酸和黄芪甲苷1:1配比的舒血管作用,说明PGI_2也参与了主动脉环的舒张作用,K~+通道阻滞剂TEA、4-AP、GLy、BaCL_2预孵后,大鼠胸主动脉的舒张作用均被抑制,但不同阻滞剂抑制程度不同,TEA、4-AP能明显抑制胸主动脉的舒血管作用,GLy、BaCL_2的抑制作用次之。说明阿魏酸和黄芪甲苷1:1配比的舒血管作用可能与K_V、K_(Ca)、K_(IR)、K_(ATP)通道有关。其细胞机制可能与通过阻断VDC和ROC减少外Ca~(2+)内流、抑制内Ca~(2+)释放有关。
【图文】：

黄芪甲苷,阿魏酸,舒张作用,标准差

如图 1.基础状态下，，阿魏酸和黄芪甲苷 1:1（1×10-4-3×10-1.5g/L）对大鼠胸主动脉环的舒作用的浓度-效应曲线，数据用均数±标准差表示与对照组对比(P<0.01),n=8..9.2 高钾状态下，FA、AS IV 分别对大鼠胸主动脉张力的影响结果显示，Kcl预收缩基础上，累积加入阿魏酸、黄芪甲苷（1×10-4-3×10-1.5g/L）能浓度依赖性的舒张胸主动脉，FA对血管环的最大舒张力为73.24%±7.69%，AS IV对血管环的最大舒张力为58.36%±4.41%，与溶剂对照组舒张率23.16%±2.35%比较有显著差异（P<0.001）（如图2）

下胸,舒张作用,对照组,数据

如图 1.基础状态下，阿魏酸和黄芪甲苷 1:1（1×10-4-3×10-1.5g/L）对大鼠胸主动脉环的舒作用的浓度-效应曲线，数据用均数±标准差表示与对照组对比(P<0.01),n=8..9.2 高钾状态下，FA、AS IV 分别对大鼠胸主动脉张力的影响结果显示，Kcl预收缩基础上，累积加入阿魏酸、黄芪甲苷（1×10-4-3×10-1.5g/L）能浓度依赖性的舒张胸主动脉，FA对血管环的最大舒张力为73.24%±7.69%，AS IV对血管环的最大舒张力为58.36%±4.41%，与溶剂对照组舒张率23.16%±2.35%比较有显著差异（P<0.001）（如图2）
【学位授予单位】：成都中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】