【摘要】：目的:帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是继阿尔兹海默病(Alzheimer’s disease,AD)之后与衰老相关的第二大神经退行性疾病,多种综合性因素参与PD的发生发展,然而其确切病理机制尚未完全阐明。目前对于PD尚无理想的治疗方法,一线抗PD药物左旋多巴等只能缓解PD的运动症状,但无法延缓PD的病理进程,且长期应用还会引发一系列的副作用,甚至加重疾病进程。因此,阐明PD病理机制并寻找有效缓解PD病程的治疗药物对PD的治疗显得尤为重要。黄芪甲苷(Astragaloside IV,AS)被证实具有明显的抗炎、抗氧化等多种药理学作用。最近的研究表明,NLRP3炎性小体和Nrf2在PD的发病过程中扮演着重要的角色,且研究证实,Nrf2可负向调节NLRP3的水平。本研究中,我们以NLRP3炎性小体介导的神经炎症和Nrf2为切入点,首先在动物模型上了探索黄芪甲苷对MPTP诱导的PD动物模型的神经保护作用,进一步在LPS诱导的BV2细胞模型上探讨了发挥作用的可能机制,以期为对PD的治疗提供理论支持。方法:应用C57BL/6小鼠腹腔注射MPTP(1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶),18mg/kg,i.p,4次/天,间隔2 h/次,建立小鼠急性MPTP损伤模型。造模前1周,分别给予治疗组不同剂量的AS(10 mg/kg、40 mg/kg)口服灌胃治疗。造模结束后第1,3,5天采用转棒实验,第6天采用Y迷宫实验检测小鼠的运动协调和平衡能力。行为实验进行期间继续给予灌胃治疗。行为学结束后,分离小鼠的中脑和纹状体,进行后期的生化指标检测。采用尼氏染色法观察黑质致密部多巴胺神经元的基本形态与神经元变性;免疫组织荧光染色法观察黑质致密部TH阳性细胞的表达、Iba1/CD68标记小胶质细胞的增殖与激活状态;Western blotting法检测中脑区域TH蛋白、NLRP3炎性小体相关蛋白(NLRP3、Caspase-1、ASC、pro-IL-1β、IL-1β)及Nrf2的蛋白表达水平。试剂盒检测血清SOD、GSH、GSHpx抗氧化相关酶活力的水平。体外实验采用LPS联合ATP诱导的BV2小胶质细胞模拟小胶质细胞激活状态,分别给予10μmol/L和40μmol/L的AS进行药物干预。Western blotting法检测细胞中NLRP3炎性小体相关蛋白(NLRP3、Caspase-1、pro-IL-1β、IL-1β)及Nrf2的蛋白表达水平。免疫组织荧光染色法观察Nrf2的表达。结果:1.AS可明显改善MPTP模型小鼠的活动功能障碍,减轻MPTP诱导的黑质致密部多巴胺能神经元受损;2.AS可明显抑制MPTP诱导的黑质致密部小胶质细胞的过度激活;3.AS可明显抑制MPTP模型小鼠中脑及LPS+ATP诱导的BV2小胶质细胞NLRP3炎性小体的激活,下调体内外模型中升高的NF-κB水平;4.AS可明显增加MPTP模型小鼠抗氧化能力,并可增加MPTP模型小鼠中脑和LPS+ATP损伤的BV2小胶质细胞Nrf2水平。结论:AS对MPTP诱导的PD动物模型多巴胺神经元受损有明显的保护作用,其作用机制可能与其抑制NLRP3炎性小体介导的神经炎症,增加Nrf2的抗氧化作用有关。
【图文】：
AstragalosideIV分子结构图
对MPTP模型小鼠转棒实验在棒上停留时间的影响
【学位授予单位】：广州中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5
【参考文献】
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2607374
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