益气化瘀清热方及其拆方对IgA肾病大鼠肾组织mTOR信号通路的影响

发布时间：2020-04-01 06:43

【摘要】：目的:通过把益气化瘀清热方及其拆方作用于实验性IgA肾病大鼠模型,检测实验中各组大鼠肾组织表达mTOR信号通路下游信号蛋白S6及4EBP1的磷酸化表达,进一步探讨mTOR信号通路在IgA肾病中的作用机制以及益气化瘀清热方及其拆方对IgA肾病的作用机理。方法:以SPF级雄性Wistar大鼠作为实验研究载体,将它们采用随机分组法分为6组:空白组、益气组、模型组、清热组、化瘀组、复方组。采用牛血清白蛋白(BSA)灌胃400mg/kg两天一次,持续8周,颈部皮肤下注射四氯化碳(CCL_4)0.1ml+蓖麻油0.3ml每周一次,持续9周,第6周经尾静脉注射脂多糖(LPS)0.25mg/kg的实验方法制作IgA肾病模型。实验中运用免疫组织化学技术检测mTOR信号通路下游信号蛋白S6及4EBP1的磷酸化表达部位,并对其进行半定量分析;运用蛋白免疫印迹技术检测各组大鼠肾皮质pS6及p-4EBP1表达量,从而进一步了解益气化瘀清热方的作用机制。结果:1在pS6蛋白的表达方面1.1磷酸化的S6蛋白在IgA肾病大鼠模型肾脏组织中主要在肾小球足细胞及壁层上皮细胞中表达,肾小管中散在表达。1.2免疫组化结果显示,各实验组pS6蛋白表达量模型组最高,益气组次之,其次依次为化瘀组、清热组、复方组、空白组,其中化瘀组与复方组及清热组与复方组之间差异无统计学意义,各实验组与模型组比较差异均有统计学意义。1.3 Western blot结果显示,各实验组磷酸化的S6蛋白表达量模型组最高,益气组次之,化瘀组、清热组与复方组最低。结果同免疫组化结果一致。2在p-4EBP1蛋白表达方面2.1磷酸化的4EBP1在IgA肾病大鼠模型肾组织中主要在肾皮质内肾小球足细胞及壁层上皮细胞中表达,肾小管中散在表达。2.2免疫组化结果显示,各实验组p-4EBP1蛋白表达量模型组最高,益气组、化瘀组、清热组次之,复方组、空白组最低,其中益气组、化瘀组、清热组之间差异无统计学意义,各实验组与模型组比较差异均有统计学意义,空白组亦有散在表达。2.3 Western blot结果显示,各实验组p-4EBP1蛋白表达量模型组最高,其次为益气组、化瘀组、清热组,复方组、空白组最低,其中益气组、化瘀组、清热组之间差异无统计学意义(P0.05),各实验组与模型组比较差异均有统计学意义。结果同免疫组化。结论:根据以上实验我们得知,(1)IgAN中mTOR信号通路被异常激活;(2)益气化瘀清热方能通过抑制mTOR的异常活化发挥治疗作用,复方组作用最强,清热组、化瘀组次之,益气组作用最弱;(3)mTOR信号传导通路下游效应蛋白pS6、p-4EBP1在IgA肾病大鼠模型中除在肾小管中表达外,尚在肾小球的足细胞及壁层上皮细胞表达。
【图文】：

3 各组大鼠 pS6/Tubulin、p-4EBP1/Tubulin 值( x±s)n（只） pS6/Tubulin p-4EBP1/Tubu12 0.5609±0.0158 0.4893±0.10210 1.2174±0.0311●▲1.3102±0.1137●9 0.8439±0.0666●▲0.8734±0.0724●10 0.7378±0.0352●▲△0.8194±0.0476●8 0.6718±0.0235●▲△◇0.8597±0.0532●▲9 0.6160±0.0127▲△◇&0.5456±0.1632▲●P<0.05；与模型组比较▲P<0.05；与益气组比较△P<0.05，◆P>0.05；，#P<0.05；与清热组比较&P>0.05，■P<0.05空白组 模型组 益气组 化瘀组 清热组 复方组

9 0.6160±0.0127▲△◇&0.5456±0.1632▲△●P<0.05；与模型组比较▲P<0.05；与益气组比较△P<0.05，，◆P>0.05；，#P<0.05；与清热组比较&P>0.05，■P<0.05图 1 pS6 蛋白表达条带空白组 模型组 益气组 化瘀组 清热组 复方组N空白组 模型组 益气组 化瘀组 清热组 复方组
【学位授予单位】：河南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

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本文编号：2610106