熊果酸抗人主动脉血管平滑肌细胞的增殖作用及机制研究

发布时间：2020-04-05 02:26

【摘要】：目的:观察熊果酸(UA)对人主动脉血管平滑肌细胞(HASMC)增殖及GRIM-19、pSTAT3、Cyclin D1蛋白的表达的影响,探讨三者与人主动脉血管平滑肌细胞增殖的相关性,阐释熊果酸对人主动脉血管平滑肌细胞的作用及可能机制。方法:复制高脂血清诱导的HASMC增殖模型,分为:正常组、15%高脂血清组、20%高脂血清组、UA给药组(10μM,20μM,30μM),采用CCK8方法检测不同时间点HASMC的增殖活性;RT-PCR和Western Blot方法检测各组细胞GRIM-19、STAT3/p-STAT3、Cyclin-D1的m RNA及蛋白水平;应用RNA干扰和质粒过表达技术,验证信号分子间的级联关系;WB技术检测干扰效率和目的蛋白表达及干扰和过表达GRIM-19后,HASMC中GRIM-19、p-STAT3、Cyclin-D1蛋白表达的变化。结果:(1)CCK8检测结果显示,15%高脂血清培养HASMC 24h可显著提高细胞增殖率;分别加入UA(10μM、20μM、30μM)作用12h,均有明显的细胞抑制作用,差异有统计学意义(P0.05);(2)m RNA和蛋白水平上,与模型组相比,正常组中内源性GRIM-19的表达高于模型组,差异有统计学意义(p0.05);(3)正常组中内源性GRIM-19呈现高表达,同时伴随有p-STAT3和Cyclin D1出现低表达;增殖组中内源性GRIM-19出现低表达,与此同时伴随有p-STAT3和Cyclin D1出现高表达,差异有统计学意义(P0.05);(4)UA作用于HASMC后,较增殖组相比,加药组中内源性GRIM-19蛋白表达增高,差异具有统计学意义(P0.05);(5)加入p-STAT3抑制剂后,Cyclin D1蛋白表达水平降低,结果提示p-STAT3很可能是Cyclin D1的上游;(6)si RNA沉默GRIM-19后,p-STAT3蛋白水平和Cyclin D1蛋白水平表达均呈现增高趋势,差异有统计学意义(P0.05),提示GRIM-19负向调控p-STAT3和Cyclin D1;(7)转染GRIM-19过表达质粒后,p-STAT3和Cyclin D1蛋白水平表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05),进一步提示GRIM-19负向调控p-STAT3和Cyclin D1蛋白的表达。结论:(1)HASMC中存在内源性GRIM-19蛋白的表达;(2)内源性GRIM-19与HASMC细胞的增殖有关系;(3)UA可能是通过上调内源性GRIM-19在HASMC中的表达下调下游p-STAT3、Cyclin D1的表达从而抑制HASMC增殖而起到抑制AS发生发展的作用。上述研究结果为UA治疗AS在临床上的应用提供了数据基础和理论依据。
【图文】：

倒置显微镜,细胞形态,血管平滑肌细胞,形态特征

呈现出谷峰状生长趋势。这些直接观察到的形态特征与血管平滑肌细胞的形态特征相吻合（见图3.1），，为实验研究提供基础。图 3.1 倒置显微镜下的细胞形态(200×)注：图为正常培养的人主动脉血管平滑肌细胞，贴壁生长 6h 后置于倒置荧光显微镜下观察。

共聚焦显微镜,细胞形态,肌动蛋白丝,表面标志

图 3.2 共聚焦显微镜下的细胞形态养的细胞采用特异的平滑肌细胞表面标志物 A-actin 细胞免疫荧光染色和焦显微镜下观察，绿色为细胞浆内的纤维细丝即平滑肌 a 肌动蛋白丝；蓝
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285

【参考文献】