生物活性分子淫羊藿苷对大鼠气道平滑肌细胞增殖、凋亡及自噬的影响

发布时间：2020-04-05 04:11

【摘要】：目的:淫羊藿苷(Icariin,ICA)是从淫羊藿总黄酮(EFs)中提取的主要活性化合物,参与许多种类细胞的细胞行为(增殖,凋亡和自噬等)的调节,但淫羊藿苷对气道平滑肌细胞(ASMCs)的作用尚未在国内外进行研究。本实验旨在研究淫羊藿苷对大鼠ASMCs增殖,凋亡和自噬的作用。方法:实验通过麻醉SD大鼠,分离其气道,用组织贴块法及差速贴壁法提取和纯化大鼠ASMCs,并通过平滑肌α-肌动蛋白(SMα-肌动蛋白)荧光对细胞纯度进行鉴定。细胞增殖/毒性检测试剂盒(CCK-8)及Edu增殖试剂盒检测大鼠ASMCs在不同浓度和不同处理时间的ICA作用下其细胞增殖情况。通过流式细胞术分析细胞周期。通过流式细胞术和TdT-UTP缺口末端标记(TUNEL)测定法检测细胞凋亡。Western blot检测细胞内cyclinE1,cyclinA1及Caspase-3,LC3蛋白的表达。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测cyclinE1,cyclinA1,Atg3,Atg5和Beclin1 mRNA的表达。结果:通过组织贴块法成功提取大鼠ASMCs,经荧光鉴定纯度在95%以上。CCK-8及Edu检测显示淫羊藿苷以时间-剂量依耐性的方式从浓度75μM开始明显抑制大鼠ASMCs的增殖(P0.01)。流式细胞仪检测显示淫羊藿苷干扰ASMCs细胞周期,淫羊藿苷处理时,细胞的S期缩短,G2期延长,cyclin E1和cyclinA1 mRNA和蛋白质表达下降。表明淫羊藿苷通过下调cyclin E1和cyclinA1的表达,影响细胞周期,抑制细胞增殖。Flow Cytometey和TUNEL检测细胞凋亡显示淫羊藿苷促进大鼠ASMCs凋亡,浓度为200μM时最为明显(P0.01)。Western blot检测发现淫羊藿苷可激活凋亡蛋白caspase-3的表达,表明淫羊藿苷可能是通过激活caspase-3相关通路诱导细胞凋亡。最后通过RT-PCR及Western blot检测发现淫羊藿苷上调自噬相关因子Atg3,Atg5和Beclin1的mRNA的表达,并促使LC3Ⅰ激活转化为LC3II,实验表明淫羊藿苷可能通过影响自噬相关因子诱导大鼠ASMCs自噬。结论:淫羊藿苷抑制ASMCs增殖,干扰细胞周期,其作用可能与下调CyclinA1和CyclinE1的表达有关;并能诱导细胞凋亡,激活casepase凋亡相关途径;除此之外还可通过调节自噬相关因子表达诱导细胞自噬。实验表明淫羊藿苷可影响大鼠ASMCs细胞行为。
【图文】：

仪器prague Dawley）雌性大鼠，6-8 周龄，体PF 级实验动物中心提供。及配置ICA，纯度≥ 98％）购自上海源生物技术 1 所示。将 ICA 用二甲基亚砜（DMSO）0℃保存，长时间保存可置于-80℃，注意

结果 大鼠 ASMCs 在光镜下的生长特点采用组织块贴壁法提取大鼠 ASMCs，可见在培养第 4、5 天左并在显微镜下观察到细胞开始从组织块周围爬出，补液后 3-4 天底，呈现“峰-谷”结构（图 2，A）。根据细胞贴壁时间的差异速贴壁法纯化后，，可见细胞呈现梭形星型，多边形等（图 2，
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

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本文编号：2614518