龟羚帕安丸对NSCs移植后PD大鼠中脑黑质Nurr1、Shh表达的影响

发布时间：2020-04-05 09:08

【摘要】：目的:从实验角度证实龟羚帕安丸对移植入PD大鼠模型脑内的NS Cs的增殖、迁移、分化具有促进作用,试通过观察龟羚帕安丸对NSCs移植后PD大鼠模型行为学、中脑黑质内移植神经干细胞存活数以及Nur r1、Shh蛋白表达的影响探讨其可能作用机制。为运用中药提高NSCs移植治疗PD的临床疗效提供可靠根据。方法:选定大鼠右侧黑质为坐标点定点注射6-OHDA 12μg以建立P D大鼠模型,手术后14d,腹腔定量注射APO(0.15mg/kg)后观测,造模成功的标准是术后的大鼠能够恒定的向左侧旋转,且在连续的30分钟内旋转总圈数超过210次。将PD大鼠随机的分为六组(中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组、美多芭组、模型组、空白组)。取孕14天的雌鼠,麻醉后打开腹腔暴漏子宫,无菌环境下取出胎鼠,剥离出胎鼠的海马组织,制作为单细胞悬液,使用无血清体外培育技术来培养及传代,免疫细胞化学法鉴定所培养细胞的Nestin蛋白表达情况,以明确其为NSCs。鉴定完成之后,将传代培养得到的NSCs制为细胞悬液,移植手术的前一天,于悬液中加入Brd U对细胞进行标记,之后调节悬液,使浓度成为1×10~6/L。抽取5μl生理盐水注射入空白组大鼠右侧纹状体,其余5组抽取等量NSCs悬液注射入大鼠的相同部位。中药高、中、低组大鼠分别以龟羚帕安丸3.6g/Kg、1.8g/Kg、0.9g/Kg的剂量用生理盐水溶解后灌胃,美多芭组以美多芭50mg/kg的剂量用生理盐水溶解后灌胃,模型组及空白组用生理盐水等量灌胃。4周后仍以APO诱导,观察大鼠旋转圈数变化,然后处死大鼠,剥离中脑黑质,制作为石蜡切片,用免疫组化法检测大鼠中脑黑质显示Brd U阳性的细胞量及Nurr1、Shh蛋白表达情况,使用LEICA显微照相系统与Digiscope-Analysis显微图像采集分析系统进行半定量研究,采用SPSS18.0软件处理分析相关数据。结果:培养的传代细胞球经鉴定后,显示有特异性的NSCs标志物N estin阳性表达。各治疗组及模型组大鼠相关症状均改善,旋转圈数明显减少,龟羚帕安丸高、中、低剂量组大鼠中脑黑质内移植NSCs存活数以及Nurr1、Shh蛋白表达较之模型组及空白组均明显升高(P0.05)。结论:体外培养的细胞明确是NSCs,移植NSCs疗法能够有效改善PD大鼠的症状,而龟羚帕安丸能够提高NSCs移植的疗效。其作用机制可能是上调了Nurr1及Shh的表达水平,而Nurr1与Shh的高表达为细胞提供了有益的微环境,增强了细胞抗凋亡能力,并且进一步促进了多种相关神经营养因子的分泌,增加了NSCs移植后存活率,进一步促进其分化为正常的DA神经元。
【学位授予单位】：河南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

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