鱼腥草中甲基正壬酮生源代谢节点的研究

发布时间：2020-04-05 10:39

【摘要】：目的:本文以鱼腥草药材为模型,通过研究其总蛋白质、水溶性成分、挥发油成分分析鱼腥草中甲基正壬酮生源代谢相关的成分体系,结合中药超分子理论、分子连接性指数、成分质控与生源代谢控制双模式质控方法,试图创建一种适宜中药特点的质量评控体系,实现全面控制中药的质量的新思路与新模式。方法:首先采用Tris-HCL法提取鱼腥草中总蛋白,用Bradford法建立标准蛋白的曲线,并测定鱼腥草中不同部位蛋白质的含量,SDS-PAGE电泳分析鱼腥草中的蛋白质,为后续研究鱼腥草中甲基正壬酮生源代谢相关酶系奠定基础;然后提取鱼腥草中的水溶性成分和挥发油成分,分别对其进行检测分析,探究鱼腥草中甲基正壬酮生源代谢相关成分体系,以GC/MS检测出的自提取的鱼腥草挥发油成分为指标,计算鱼腥草挥发油成分的分子连接性指数;最后以甲基正壬酮为配基,γ-缩水甘油醚氧丙基三甲氧基硅烷为硅烷偶联剂,采用硅胶法制备甲基正壬酮亲和介质色谱,再用GC法、亲和介质法和孵育法钓取鱼腥草蛋白质中的甲基正壬酮生源代谢酶系,为鱼腥草中其他成分的生源代谢节点研究及其后续研究奠定基础。结果:Bradford法建立标准蛋白的曲线方程为Y=0.03535C+0.08445(R2=0.9995),测得野生新鲜鱼腥草全株、叶、根和根茎中蛋白质的含量依次为7.540μg·m L-1、8.757μg·m L-1、6.889μg·m L-1和5.889μg·m L-1,市场购买的鱼腥草根茎中蛋白质的含量为4.522μg·m L-1,SDS-PAGE电泳分析鱼腥草中蛋白质的分子量范围在10-100 k Da。鱼腥草水溶性成分指纹图谱显示其种类很多,且精密度、重复性、稳定性实验均良好,分离度也比较好;GC/MS检测出的鱼腥草挥发油成分有50种,含量前三的依次为甲基正壬酮、β-蒎烯和α-蒎烯,计算GC/MS检测出的自提取的鱼腥草挥发油成分的分子连接性指数数值范围在2.480-12.822之间,其平均分子连接性指数数值为5.398,甲基正壬酮的分子连接性指数数值为5.265,鱼腥草素(癸酰乙醛)的分子连接性指数数值为5.731,癸酰乙酸的分子连接性指数数值为5.639。鱼腥草中甲基正壬酮生源代谢节点的研究中,GC法显示,保留时间为15 min左右明显的成分群峰为甲基正壬酮代谢相关的成分群;成功的制备了甲基正壬酮亲和介质,并调取了鱼腥草中甲基正壬酮的生源代谢酶系,其分子量大小为10 k Da。结论:野生新鲜鱼腥草中蛋白质的含量比市场购买的鱼腥草根茎中的蛋白质含量都高,且野生新鲜鱼腥草中蛋白质的含量高低依次为全株、叶、根、根茎,鱼腥草中蛋白质的分子量大多数都为大分子;鱼腥草水溶性成分和挥发油成分中未检测出鱼腥草素和癸酰乙酸,可能是鱼腥草素经过氧化后生成癸酰乙酸,其再进一步降解生成甲基正壬酮,故检测出来的鱼腥草挥发油成分中甲基正壬酮的含量最高。鱼腥草中甲基正壬酮的生源代谢酶的分子量大小为10 k Da左右,进而推断鱼腥草植物体中甲基正壬酮的代谢途径为Decanoylacetaldehyde 3-Oxododecanoic acid=2-Undecanone+CO2,代谢酶为3- oxolaurate decarboxylase。
【图文】：

表 2 鱼腥草不同部位的蛋白含量测定（n=3）Table 2. Determination of protein content in different parts of H.cordata (n=3部位 吸光度 浓度/μg·mL全株 0.351 7.540叶 0.394 8.757根 0.328 6.889根茎 0.293 5.899根茎* 0.245 4.522E 电泳同部位蛋白质的 SDS-PAGE 电泳分析见图 2，编号 1-6 为新鲜野场购买的鱼腥草根茎，，从左至右依次为：根-稀释的根-根茎-稀释-稀释的根茎。

图 3：鱼腥草水溶性成分的 HPLC 图谱（回流水提取法）Fig 3. The HPLC chromatographic fingerprint of water-solubility components in HCT图 4：鱼腥草水溶性成分的 HPLC 图谱（超声醇提法）Fig 4. The HPLC chromatographic fingerprint of water-solubility components in HCT4 小结通过对鱼腥草水溶性成分的 HPLC 图谱研究，鱼腥草中化学成分出峰较多的 HPLC谱条件为：色谱柱 Welch Ultimate XB-C18 (4.6*250mm, 5μm)；流动相：A: 0.1%磷酸水
【学位授予单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R284

【参考文献】

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本文编号：2614909