积雪草苷抑制高糖腹透液诱导人腹膜间皮细胞氧化应激的机制研究

发布时间：2020-04-07 22:10

【摘要】：目的:观察积雪草苷(asiaticoside,AS)对高糖腹透液(peritoneal dialysis solution,PDS)诱导人腹膜间皮细胞氧化应激水平及p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路活化的影响,探讨AS抗腹膜氧化应激的分子机制。方法:体外培养人腹膜间皮细胞株HMrSV5,CCK-8法检测4.25%葡萄糖腹透液及不同浓度(10、50、100、150、200μmol/L)的AS对细胞活力的影响;根据CCK-8检测细胞活力的结果筛选出用于后续实验的AS的合适药物浓度,将细胞随机分为7组:对照组、PDS 组、AS 低(50 μmol/L)、中(100 μmol/L)、高(150μmol/L)剂量组、NAC 组、SB203580组,分别培养6、12、24 h,采用双氯荧光素(DCFH-DA)染色、流式细胞术检测细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的产生;比色法检测细胞中丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、总超氧化物歧化酶(Total-superoxide dismutase,T-SOD)的水平;Western Blot 检测磷酸化 p38MAPK(phosphorylated-p38MAPK,p-p38MAPK)、p38MAPK 蛋白的表达。结果:①PDS作用下HMrSV5细胞活力下降,ROS生成增多,p-p38MAPK表达上调,均呈时间相关,以PDS作用24h最显著;PDS作用24h细胞中MDA水平升高,T-SOD水平下降;②低、中、高剂量的AS能提高PDS作用下的细胞活力,减少ROS的生成,中、高剂量的AS能降低PDS作用下细胞中MDA的水平,升高T-SOD的水平,下调p-p38MAPK的表达,均呈剂量相关,以AS高剂量组作用最显著;③抗氧化剂NAC及p38MAPK抑制剂SB203580均能减少ROS的生成,降低细胞中MDA的水平,升高T-SOD的水平,下调p-p38MAPK的表达。结论:高糖腹透液可以激活p38MAPK信号通路,诱导人腹膜间皮细胞氧化应激;积雪草苷可能通过抑制p38MAPK信号通路降低高糖腹透液诱导的人腹膜间皮细胞的氧化应激水平,发挥对腹膜的保护作用。
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285

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本文编号：2618446