芍药苷对高糖刺激肾系膜细胞增殖的影响及机制研究

发布时间：2020-04-07 19:26

【摘要】：目的目前,我国已成为糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)患病率最高的国家,每年发病人数不断攀升。DM患者血糖长期处于高水平,可引起肾脏的微血管发生病变,是DM的常见并发症之一,也是导致终末期肾病(End-stage renal disease,ESRD)的主要原因之一。糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)的发病机制尚不完全清楚,其病理表现涉及到肾小球系膜细胞(Mesangial cells,MCs)的增殖活化以及细胞外基质的积聚。有研究表明某些因素导致MCs的增殖与凋亡与p53有关。p53能上调许多靶基因的表达,从而在DNA修复、细胞凋亡、分化、衰老和抗血管生成等方面发挥作用,可能参与了调控DN系膜细胞的增殖活化,通过某种方法抑制MCs的增殖活化对减缓DN的发展及其向慢性演变有重要意义。目前DN的治疗主要围绕早期干预各种危险因素等措施以及ESRD的肾脏替代治疗,无特别有效的治疗药物。白芍总苷(total glucosides of paeony,TGP),其有效活性成分为芍药苷(Paeoniflorin,PF),具有抗炎、抗氧化和免疫调节等作用,对某些肾脏疾病可能有肾保护作用。基础研究发现PF能够抑制MCs增殖,是否与P53基因相关的调控通路有关联有待深入研究。本研究通过PF干预高糖培养下的MCs,检测细胞增殖、凋亡情况以及p53蛋白水平等,初步探究PF抑制MCs增殖是否与p53蛋白相关。方法1.正常糖浓度培养的系膜细胞中加入不同浓度梯度的PF(10 umol/L、20 umol/L、40 umol/L、80 umol/L、160 umol/L),CCK-8试剂盒检测细胞活力以选取合适的试验浓度。2.根据培养条件的不同将MCs分为6组:甘露醇组(Motl)、正常糖浓度组(NG)、高糖组(HG)、高糖+20 umol/L PF组(HG+PF20)、高糖+40 umol/L PF组(HG+PF40)、高糖+80 umol/L PF组(HG+PF80)。CCK-8试剂盒、EdU试剂盒、流式细胞术分别检测MCs细胞活力、增殖及凋亡情况。Western Blot法检测Ⅳ型胶原(Ⅳ-Col)、p53、p-p53、Bcl-2、Bax蛋白表达情况。3.通过CCK-8实验选择合适浓度的p53抑制剂进行实验,分4组如下:高糖组(HG)、高糖+0.01 umol/L PFT-α组(HG+PFT)、高糖+80 umol/L PF组(HG+PF80)、高糖+0.01 umol/L PFT-α+80 umol/L PF组(HG+PFT+PF80)。EdU试剂盒、流式细胞术检测MCs的增殖与凋亡情况。结果1.20 umol/L、40 umol/L、80 umol/L PF对正常糖浓度培养下的MCs细胞活力无明显影响(P0.05),故选用浓度为20 umol/L、40 umol/L、80 umol/L的PF进行试验。2.与NG组相比,高糖环境可以促进MCs增殖,p53、Bax、p-p53蛋白水平降低,Bcl-2、Ⅳ-Col蛋白水平增高。3.与HG组相比,40 umol/L或80 umol/L PF可以明显抑制高糖刺激导致的MCs增殖(P0.05),促进凋亡;而HG+PF20组MCs的增殖未明显受到抑制(P0.05)。Western blot结果显示:与HG组相比,HG+PF20组、HG+PF40组和HG+PF80组p53、Bax、p-p53蛋白水平显著升高(P0.05),Bcl-2、Ⅳ-Col蛋白水平降低(P0.05)。4.与HG+PF80组相比,p53抑制剂使PF对MCs增殖的抑制作用减弱。结论1.高糖环境下MCs增殖活跃,p53表达水平降低。2.PF能够抑制高糖培养下MCs增殖,p53蛋白表达水平升高,细胞的凋亡水平增加。3.抑制p53功能,PF抑制高糖培养下MCs增殖、促进细胞凋亡的作用减弱。综上,PF抑制MCs增殖可能与p53上调有关。
【图文】：

激光共聚焦显微镜下观察各组系膜细胞的增殖

安徽医科大学硕士学位论文4.7 PFT-α 干预对系膜细胞增殖情况的影响在激光共聚焦显微镜下观察，如图 8 所示，MCs 细胞核染为染为红色。与 HG 组比较，加入 p53 抑制剂 PFT 组红色HG+PFT+PF80 组与 HG+PF80 组对比，红色荧光明显增强；而组比较，红色荧光强度明显减弱。以上提示 80 umol/L PF 可增殖减弱，加入 p53 抑制剂 PFT 反而使 PF 抑制 MCs 增殖的作PF 可能是通过提高 p53 蛋白水平，进而促进 MCs 凋亡，抑制
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

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本文编号：2618296