养阴通秘胶囊对小鼠气阴血虚便秘模型的缓解作用及机制研究

发布时间：2020-04-08 20:00

【摘要】：便秘是一种临床上较为常见的病症,通常表现为排便次数减少,粪便干结,排便困难。长期便秘可导致并发症的产生,严重影响人们的生活质量。关于便秘的治疗药物种类繁多,大部分药物初期使用疗效较好,但随着使用时间的延长,药物副作用随之出现,甚至出现药物依赖性。对于便秘的治疗祖国医学经验丰富,同时疗效确切、副作用小。中成药养阴通秘胶囊能够行气通便,养阴润燥,适用于各种虚性便秘,但其作用机制尚未明确,需要进一步探索。本研究以养阴通秘胶囊灌胃给予气阴血虚便秘模型小鼠,观察养阴通秘胶囊对小鼠气阴血虚便秘模型的缓解作用,并初步探讨其作用机制。方法:将120只昆明小鼠随机分为空白组、模型组、养阴通秘胶囊低、中、高(0.3、0.6、1.2 g/kg)组及阳性药麻仁软胶囊(0.6 g/kg)组,每组20只。模型组、养阴通秘胶囊各剂量组及阳性药组小鼠灌胃(ig)给予复方利血平0.3 mg/kg和L-甲状腺素0.8 mg/kg,每天1次,连续7天,并于第1、3、5、7天尾静脉放血(0.3m L/20 g);空白组ig给予等体积0.5%羧甲基纤维素钠(0.5%CMC-Na),不放血。造模同时空白组与模型组小鼠ig给予0.5%CMC-Na 20 m L/kg,其余各组ig给予相应药物,每天1次,连续给药21天。给药期间观察各组小鼠体征变化及粪便性状,并每天记录小鼠体重;测定外周血红细胞(RBC)数、血红蛋白(Hb)含量、首粒黑便排出时间、肠道推进率、粪便含水量及数量;测定血清中胃动素(MTL)、胃泌素(GT)、P物质(SP)、生长抑素(SST)含量及结肠组织匀浆中血管活性肠肽(VIP)、一氧化氮(NO)、乙酰胆碱(Ach)含量;HE染色观察结肠病理形态学改变;免疫组化检测结肠组织中干细胞因子受体(c-kit)、水通道蛋白3(AQP3)、水通道蛋白8(AQP8)的表达及western blot检测结肠组织中c-kit、干细胞因子(SCF)的表达。结果:1.与空白组比较,模型组小鼠精神萎靡,活动及摄食量减少,大便外观干硬、粒形小、光泽度低;与模型组比较,养阴通秘胶囊低剂量组小鼠活动状态、摄食量及排便情况无明显改善,养阴通秘胶囊中、高剂量组及阳性药组小鼠倦怠少动症状逐渐改善,排便粒数增多,香肠状或团块状光滑软便增加。2.与空白组比较,模型组小鼠RBC数、Hb含量均显著降低(p0.01);与模型组比较,养阴通秘胶囊低、中、高剂量组小鼠RBC数显著升高(p0.01),Hb含量有升高趋势(p0.05),阳性药组小鼠RBC数和Hb含量均显著升高(p0.01)。3.与空白组比较,模型组小鼠首粒黑便排出时间显著增加(p0.01);与模型组比较,养阴通秘胶囊低剂量组小鼠首粒黑便排出时间无显著变化(p0.05),养阴通秘胶囊中、高剂量组及阳性药组小鼠首粒黑便排出时间显著减少(p0.05或p0.01)。4.与空白组比较,模型组小鼠6h内粪便粒数和含水量显著减少(p0.01);与模型组比较,养阴通秘胶囊低剂量组小鼠6h内粪便粒数和含水量无显著变化(p0.05),养阴通秘胶囊中、高剂量组及阳性药组小鼠6h内粪便粒数和含水量显著增加(p0.05或p0.01)。5.与空白组比较,模型组小鼠肠道炭末推进率显著降低(p0.01);与模型组比较,养阴通秘胶囊低剂量组小鼠肠道炭末推进率无显著变化(p0.05),养阴通秘胶囊中、高剂量组及阳性药组小鼠肠道炭末推进率显著升高(p0.01)。6.HE染色结果显示:空白组粘膜层上皮细胞完整、排列整齐、规则,杯状细胞形态正常,数目未见减少;模型组粘膜层上皮细胞破损、缺失,杯状细胞减少,固有层结肠腺杯状细胞缺失,固有层及粘膜下层散在炎细胞浸润,肌层、外膜未见异常;养阴通秘胶囊低剂量组偶见粘膜层上皮细胞破损、缺失,固有层结肠腺杯状细胞缺失,固有层、粘膜下层散在炎细胞浸润,肌层、外膜未见异常;养阴通秘胶囊中剂量组偶见固有层结肠腺杯状细胞缺失,固有层及黏膜下层散在炎细胞浸润,肌层、外膜未见异常;养阴通秘胶囊高剂量组及阳性药组粘膜层上皮细胞完整、排列整齐、规则,固有层结肠腺杯状细胞形态正常,数目未见减少,肌层、外膜未见异常,养阴通秘胶囊可不同程度改善其病理形态学损伤。7.与空白组比较,模型组小鼠血清中MTL、SP含量显著降低,GT、SST含量显著升高(p0.01);与模型组比较,养阴通秘胶囊低剂量组小鼠血清中MTL含量显著升高,而GT含量显著降低(p0.05),养阴通秘胶囊中、高剂量组及阳性药组小鼠血清中MTL、SP含量均显著升高,而GT、SST含量均显著降低(p0.05或p0.01)。8.与空白组比较,模型组小鼠结肠组织中VIP、Ach含量显著降低,NO含量显著升高(p0.01);与模型组比较,养阴通秘胶囊低剂量组对结肠组织VIP、Ach、NO含量均无显著影响(p0.05),养阴通秘胶囊中、高剂量组及阳性药组VIP、Ach含量显著升高,NO含量显著降低(p0.05或p0.01)。9.免疫组织化学结果显示:与空白组比较,模型组小鼠结肠中c-kit的表达显著减少,AQP3、AQP8的表达显著增加(p0.05或p0.01);与模型组比较,养阴通秘胶囊低剂量组小鼠结肠中c-kit、AQP3、AQP8的表达无显著变化(p0.05),养阴通秘胶囊中、高剂量组及阳性药组c-kit的表达显著升高,AQP3、AQP8的表达显著降低(p0.05或p0.01)。10.Western blot实验结果显示:模型组小鼠结肠中c-kit、SCF蛋白表达降低,养阴通秘胶囊低剂量组c-kit蛋白表达升高,养阴通秘胶囊中、高剂量组及阳性药组c-kit、SCF的蛋白表达均升高。结论:本研究结果表明,养阴通秘胶囊能明显缩短气阴血虚便秘模型小鼠首粒黑便排出时间,提高肠道推进率、粪便含水量及数量,调节肠激素及神经递质含量,下调结肠中AQP3、AQP8的表达从而改善便秘症状,其缓解作用可能通过调控SCF/c-kit信号途径增加结肠中卡哈尔间质细胞的表达,改善结肠慢波的产生,调控平滑肌收缩节律实现的。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5;R-332

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本文编号：2619774