枇杷叶总黄酮的提取纯化工艺及体外抗氧化研究

发布时间：2020-04-09 01:42

【摘要】：背景枇杷叶是蔷薇科枇杷属植物枇杷Eriobotrya japonica(Thunb.)Lindl.的干燥叶,归肺、胃经,具清肺止咳、降逆止呕作用,用于治疗胃热呕逆、气逆喘气、肺热咳嗽、烦热口渴。枇杷叶总黄酮作为天然药物的一种,开发枇杷叶总黄酮对枇杷叶资源的综合利用率具有非常重要的社会意义。因此,基于高得率、低成本、易操作等原则,优选枇杷叶总黄酮的最佳提取工艺及纯化工艺,制备较高纯度的枇杷叶总黄酮,为枇杷叶总黄酮的工业化生产提供理论依据。目的(1)优化枇杷叶总黄酮的提取工艺;(2)优化枇杷叶总黄酮的纯化工艺;(3)对枇杷叶总黄酮的化合物进行鉴定;(4)探索枇杷叶总黄酮体外抗氧化活性。方法:(1)通过单因素试验筛选出提取溶剂、提取时间、提取次数等4个影响提取工艺的因素,再利用Box-Behnken响应面分析法,以枇杷叶总黄酮提取量为考察指标,优化得到最佳提取工艺;(2)通过单因素试验筛选出乙醇浓度、上样体积、上样液pH等3个影响纯化工艺的因素,再利用Box-Behnken响应面分析法,以枇杷叶总黄酮含量为考察指标,优化得到最佳纯化工艺;(3)采用颜色鉴别、LC-MS/MS等技术对枇杷叶总黄酮化合物进行初步的鉴定;(4)采用普鲁士蓝法、邻二氮菲法、DPPH法分别考察枇杷叶总黄酮的还原能力、羟基自由基清除能力、DPPH自由基的清除能力。结果(1)乙醇浓度、乙醇倍数对提取值影响非常显著,模型最大值时的参数:乙醇浓度为71.90%,乙醇倍数为10.58,提取时间为61.80min,提取次数为1.92次;(2)乙醇溶液洗脱对含量影响非常显著,模型最大值时的参数:乙醇浓度为45.75%,上样体积为23.93,上样液pH为3.84;(3)在盐酸-镁粉试验、三氯化铝反应、氨水反应、紫外线照射反应均呈现阳性反应现象;LC-MS/MS分析结果显示得到2个黄烷醇类、6个黄酮醇苷类、3个黄酮醇类、1个多羟基芪类等12个化合物。(4)清除DPPH自由基能力由强到弱排列:枇杷叶总黄酮枇杷叶总黄酮醇提取物抗坏血酸Vc。还原力由强到弱排列为抗坏血酸Vc枇杷叶总黄酮枇杷叶总黄酮醇提取物。枇杷叶总黄酮的清除羟基自由基能力与样品浓度存在着良好的线性关系。结论(1)修正后的最佳提取工艺参数:乙醇浓度定为72%,乙醇倍数为11,提取时间为62 min,提取2次。(2)修正后的最佳纯化工艺参数:乙醇浓度定为46%,上样体积定为24 ml,上样液pH定为3.8。(3)枇杷叶总黄酮含2个黄烷醇类、6个黄酮醇苷类、3个黄酮醇类、1个多羟基芪类等12个黄酮类化合物。(4)枇杷叶总黄酮的清除DPPH自由基能力和清除羟基自由基能力均优于抗坏血酸Vc的。纯化后的枇杷叶总黄酮,清除DPPH自由基能力、清除羟基自由基能力和还原力均明显得到了改善。
【图文】：

图 1 芦丁的标准曲线Fig. 1 The standard curve of rutin见图 1 所示，芦丁的回归方程为 Y=10.16X-0.0006，相关系数（r）为 0.9996，在091 mg/ mL 浓度范围之内，吸光度与芦丁浓度成良好的线性关系。3 样品中总黄酮含量的测定方法精密吸取供试品溶液 2.0 mL，同对照品测定方法，在紫外分光光度计上，，于 510处进行测定吸光值，以吸光值（Y）为纵坐标，芦丁浓度（X）为横坐标，根据回程计算样品中总黄酮含量。试验设计1 单因素试验1.1 提取溶剂的考察取粉碎后的枇杷叶样品 2 g，精密称定，分别以一系列浓度的乙醇溶液为提取溶

（%）（A）（mg/mL）（mg）0 0.198 0.020 2.44310 0.214 0.021 2.64020 0.275 0.027 3.39130 0.341 0.034 4.20340 0.372 0.037 4.58450 0.402 0.040 4.95360 0.436 0.043 5.37270 0.452 0.045 5.56880 0.441 0.044 5.43390 0.361 0.036 4.44995 0.346 0.034 4.264：浓度值及提取量值均保留小数点后三位
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R284.2

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本文编号：2620111