巴戟天抗抑郁和抗疲劳的活性成分研究

发布时间：2020-04-09 03:08

【摘要】：巴戟天(Morinda officinalis How)是茜草科巴戟属植物巴戟天的干燥根,与益智仁、槟榔、砂仁并成为我国“四大南药”。具有治疗风湿疼痛、补肾虚、降血压和强筋健骨等功能。目前,对其研究主要集中在粗提物的功效上,对功效成分的研究相对不足。为了加强对巴戟天的深加工及其生物活性的研究,本文对其抗抑郁和抗疲劳的功能及活性成分进行研究。1.巴戟天粉碎过筛后经75%乙醇重复提取二次,减压浓缩得到巴戟天醇提物,得率为21.7%;抽滤经去离子水提取二次,减压浓缩得到巴戟天水提物,用95%乙醇醇沉搅拌,静置过夜,得到巴戟天水提醇沉物和醇溶物,得率分别为12.3%和8.6%。经抗抑郁和抗疲劳小鼠行为学模型对巴戟天醇提物、巴戟天水提醇沉物和醇溶物进行活性检测(小鼠灌胃剂量为1.5 g/Kg/d,灌胃体积是0.1 mL/10 g/只)。结果显示巴戟天水提醇沉物具有抗抑郁的作用,巴戟天醇提物具有抗疲劳的作用。2.巴戟天水提醇沉物依次经Hw-55F和Hw-40凝胶色谱柱分离,通过小鼠抗抑郁行为学模型实验检测(小鼠灌胃剂量为0.8 g/Kg/d,灌胃体积是0.1 mL/10 g/只),经Hw-40凝胶柱分离得到的组分D-2抗抑郁活性最显著。通过测定各组小鼠大脑海马区和纹状体中多巴胺浓度,具有抗抑郁作用的D-2组小鼠大脑海马区和纹状体中DA浓度均显著升高。组分D-2经过ODS-AQ色谱柱纯化,得到4个单体化合物,经NMR结构鉴定,分别为:耐斯糖(1)、菊粉五糖(2)、菊粉六糖(3)、菊粉七糖(4)。3.比较灌胃和腹腔注射两种给药方式(小鼠灌胃剂量为0.8 g/Kg/d,灌胃体积是0.1mL/10 g/只;小鼠腹腔注射剂量为0.8 g/Kg/d,小鼠的灌胃体积是0.1 mL/10 g/只),实验结果显示巴戟天组分D-2通过灌胃经口给药的方式发挥抗抑郁作用,而通过腹腔注射没有发挥出抗抑郁的作用。4.巴戟天醇提物依次经过大孔树脂AB-8柱、MCI柱进行分离,通过小鼠行为学疲劳模型实验(小鼠灌胃剂量为1.0 g/Kg/d,灌胃体积是0.1 mL/10 g/只),结果表明MCI柱分离得到组分E-1具有抗疲劳的作用。将MCI柱水洗脱物E-1反复上样至ODS-A和ODS-AQ色谱柱进一步纯化,最终分离得到5、6、7三个化合物,经NMR结构鉴定,分别为4-羧基-7-羟基-8-羟甲基-3,6-环戊烯环烯醚萜苷(5)、4-乙酰基-8-羟甲基-3,7-环戊烯环烯醚萜苷(6)、4-羧基-7-羟基-8-羟甲基-10-乙酰基-3,6-环戊烯环烯醚萜苷(7)。且本文得到的5、6、7三个环烯醚萜类化合物是首次从巴戟天中分离得到的。
【图文】：

巴戟天

1 巴戟天概述中药巴戟天（Morinda officinalis How）又称黑藤钻、鸡眼藤、三角藤，是茜草属双子叶植物巴戟天的干燥根，味甘、微涩，性微温，是我国四大南药之一，主于四川、江西、海南、福建和广东、广西等地区[1-2]。《中国药典》和中药典籍《草经》历代本草均记载巴戟天常用于强筋健骨、治疗风湿疼痛、滋补肾虚和缓解[3-6]。临床医学上还常用巴戟天治疗小便失禁、阳痿、早泄、不孕不育等病症[7-10]近三十年来，巴戟天不仅在国内广泛使用，还在日本、韩国等国家常作药用，研究者深入研究巴戟天的化学成分和药理活性，其主要成分包括：糖类、环烯醚萜醌类、生物碱类、黄酮类、氨基酸及微量元素等[11-18]。药理活性研究发现巴戟天统中医学提及强筋健骨、治疗风湿疼痛、滋补肾虚和缓解疲劳等[19-22]作用之外，增强免疫、抗骨质疏松、抗疲劳、抗抑郁和抗肿瘤等功效[23-27]，开展对巴戟天的并将其制成安全性更高、效果更显著的保健品、药品顺应了时代的要求。近年来不少中药企业研究团队展开了对巴戟天中活性物质的分析研究和应用。由此可见对中药功能性成分的研究及其深加工，实现中药材作为天然产物的优势向产品转将是我国农业发展的新契机，将成为我国经济新的增长点，促进国名经济发展[28

曲线,测定标准,多巴胺,曲线

江南大学硕士学位论文实验结束 24 h 后，使用异氟烷对实验小鼠进行麻醉，将小鼠放置生理盐水对小鼠经心脏灌注，快速分离出小鼠大脑左右海马组织-80℃冷冻保存备用。HPLC 检测各组小鼠大脑海马区和纹状体多巴胺浓度。具体步骤如马组织和纹状体，加入 200 L 的 mol/L 高氯酸，采用冰浴匀浆 1 3 min 后取上清液过 0.22 μm 滤膜，即处理完毕，进样分析。色谱条件：（1）采用 Waters Xbridge HSS T3 色谱柱（4.6 mm×150件：波长范围 280 nm~320 nm；（3）柱温：30℃；（4）流速：0.8 mH=3.0，浓度为 0.1 mol/L 磷酸二氢钾溶液和甲醇；（6）进样量：2标准曲线绘制：稀释多巴胺（DA）标准液，配制浓度为 0.2 ng/μL、4.0 ng/μL 和 10.0 ng/μL 的 DA 溶液。待 HPLC 基线平衡后，按上量 10 μL，记录数据。以 DA 浓度为横坐标，峰面积为纵坐标。LC 检测，，多巴胺在 0.2 ng/μL~10 ng/μL 之间具有良好的线性关系1.6724×106x-2.9850×105（R2=0.9993），如图 3-4 所示。
【学位授予单位】：江南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5;R284.2

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