土槿乙酸抗糖尿病活性及缓解胰岛素抵抗机制研究

发布时间：2020-04-09 04:02

【摘要】：糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)是一种由遗传、肥胖、免疫功能紊乱和环境等多种因素引起的以慢性高血糖为特征的代谢综合症。Ⅱ型糖尿病主要由胰岛素分泌不足和胰岛素抵抗(IR)所造成,其中胰岛素抵抗是Ⅱ型糖尿病病发的主要因素,也是人们研究的主要方向。胰岛素抵抗是指胰岛素作用的靶器官对胰岛素作用的敏感性下降,正常剂量的胰岛素所产生的生物学效应低于正常生物学效应的一种状态。因此胰岛素抵抗会导致外周组织摄取葡萄糖的能力严重下降,使血糖升高。产生胰岛素主要有肝细胞,脂肪细胞,骨骼肌细胞三种,临床上,由于肝癌细胞(HepG2)来源于肝细胞株与肝细胞同源,有肝细胞的相似性易于培养,因此胰岛素抵抗研究常用HepG2细胞。缓解胰岛素抵抗是Ⅱ型糖尿病研究的重点,因此临床上亟需一种新型且毒副作用小的药物。土荆皮是松科植物金钱松(Pseudolarix kaempferi Gord)的干燥根皮或近根树皮,其气微、味辛、性温温和,具有杀虫止痒的功效,常用于治疗癣症。土槿乙酸(Pseudolaric acid B,PAB)是从土荆皮中提取的二萜酸化合物,分子式C_(23)H_(28)0_8。本文考察了土槿乙酸抗糖尿病活性及缓解胰岛素抵抗机制研究。1.利用高浓度的胰岛素构建HepG2细胞胰岛素抵抗模型,衣霉素(Tun)和寡霉素(Oli)分别诱导内质网应激和线粒体损伤模型。利用不同浓度的土槿乙酸(PAB)进行缓解胰岛素抵抗糖代谢研究,采用ELISA实验验证土槿乙酸促进胰岛素β细胞胰岛素释放的效果。2.土槿乙酸缓解HepG2细胞胰岛素抵抗的机制研究。采用Western-Blotting方法从蛋白水平检测不同浓度土槿乙酸作用IR-HepG2细胞,对HepG2细胞增值信号通路关键蛋白PPARγ、IRS-1、Akt、P-akt、Grp78等蛋白表达的影响。3.土槿乙酸抗糖尿病活性的研究。利用高糖高脂和STZ构建Ⅱ型糖尿病小鼠模型,小鼠腹腔注射不同浓度的PAB,检测小鼠血糖、胰岛素、胆固醇、甘油三酯等Ⅱ型糖尿病代谢指标。本文通过对土槿乙酸抗糖尿病活性及缓解胰岛素抵抗机制研究得到如下结果。1.10μM胰岛素作用HepG2细胞36小时为胰岛素抵抗的最佳模型,10μM PAB能够显著缓解HepG2胰岛素抵抗、内质网应激,线粒体损伤,增加葡萄糖的消耗。2.不同浓度PAB作用胰岛素抵抗HepG2细胞24h后,随着PAB浓度的增加,PPARγ表达上调,IRS-1表达上调,P-Akt上调,GRP-78表达下调。3.PAB可显著降低糖尿病模型组小鼠血糖值,提高胰岛素浓度,改善甘油三酯、总胆固醇等糖尿病代谢性问题,且随着PAB浓度增高,显著性增强,某些指标强于阳性药罗格列酮。通过实验得出以下结论:土槿乙酸可以缓解IR-HepG2细胞。土槿乙酸通过影响PPARγ、IRS-1作用到胰岛素受体缓解IR-HepG2细胞。土槿乙酸可以抗Ⅱ型糖尿病活性通过缓解胰岛素抵抗。上述研究为广泛筛选抗糖尿病药物提供了新的思路。
【图文】：

土槿乙酸,结构式

型的PPARγ激动剂罗格列酮治疗2型糖尿病的主要方式之一，这恰恰为土槿乙酸作为新型的抗Ⅱ型糖尿病提供了理论依据。图0-1 土槿乙酸结构式0.4 本课题的设计思想及研究内容1.查阅文献得出，大部分的研究者只是利用单一因素构建胰岛素抵抗模型并验证其缓解机制。本实验利用高浓度的胰岛素构建HepG2细胞胰岛素抵抗模型，衣霉素（Tun）和寡霉素（Oli）分别诱导内质网应激和线粒体损伤模型。利用不同浓度的土槿乙酸（PAB）进行缓解胰岛素抵抗糖代谢研究，采用ELISA实验验证土槿乙酸促进胰岛素β细胞胰岛素释放的效果。从而得到了内质网应激，线粒体损伤与胰岛素抵抗之间相互联系。2.大量文献表明，，临床上常用的抗胰岛素抵抗类药物都是通过PPARγ这一机

降糖,胰岛素,肝癌细胞,作用时间

章土槿乙酸缓解肝癌细胞（HepG2）胰岛素抵抗的研究12图1-1 不同浓度、不同作用时间胰岛素对肝癌细胞HepG2降糖量A：PAB 24h B：PAB 36hC：PAB 48h D：PAB 60h###p<0.001 as compared with the control group,*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001 as compared with only IR groups.MTT实验显示，0-50μM胰岛素作用HepG2细胞60h小时后，HepG2细胞存活率无显著性变化，细胞正常存活。（图1-2）
【学位授予单位】：辽宁大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285

【参考文献】