川陈皮素和橙皮苷对脂肪积累影响的研究

发布时间：2020-04-09 19:02

【摘要】：肥胖在发达国家是一个主要的健康问题,近一些年来,肥胖在发展中国家和不发达的国家中也日益成为危害健康的一个危险因素。肥胖会导致心血管疾病、胰岛素抵抗和糖尿病等肥胖相关性疾病的发生和发展,另外,肥胖被报道和某些癌症的发生相关。因此,抗肥胖的研究变得十分重要。陈皮活性成分川陈皮素和橙皮苷常被用于抗肿瘤、抗炎和抗高血压的研究。近年来,它们也被用于抗胰岛素抵抗和抗脂肪积累的研究。为了验证川陈皮素和橙皮苷的抗肥胖潜力,本文将对两者在3T3-L1细胞和线虫模型上的抗脂肪积累的功效和机制开展研究,得到的研究结果如下:(1)川陈皮素单独作用于3T3-L1细胞时,油红O染色结果和脂肪抽提定量实验显示3T3-L1细胞内的脂肪含量与对照组相比升高了,实时定量PCR显示3T3-L1细胞内的脂肪生成基因CEBP表达与对照组相比上调了,暗示川陈皮素在3T3-L1细胞内通过促进脂肪生成基因的表达来促进脂肪生成。(2)应用PI3K/Akt特异性阻断剂LY294002阻断3T3-L1细胞内的Akt信号后,油红O染色结果和脂肪抽提定量实验显示川陈皮素的升高细胞内脂肪含量的作用被抑制,实时定量PCR和western blot实验提示川陈皮素通过PI3K/Akt信号途径促进3T3-L1细胞内的脂肪积累。(3)在“鸡尾酒”诱导剂培养基中,川陈皮素抑制3T3-L1细胞内的脂肪积累。这种抑制作用得到了脂肪抽提定量实验结果和实时定量PCR结果的支持。进一步的诱导剂成分的组合实验证明,川陈皮素只能通过和含有IBMX和DEX或胰岛素的诱导剂成分组合来抑制3T3-L1细胞内的脂肪积累,然而,随后的阻断IBMX通路的实验暗示川陈皮素不通过cAMP减少3T3-L1细胞内的脂肪生成。(4)应用AMPK特异性阻断剂Compound C阻断3T3-L1细胞内的AMPK后,脂肪抽提定量实验和实时定量PCR结果显示川陈皮素恢复了细胞内脂肪积累的作用。进一步地,western blot实验揭示3T3-L1细胞内的PI3K/Akt信号减弱和AMPK活化相关,提示川陈皮素可能通过活化AMPK而致PI3K/Akt信号抑制导致3T3-L1细胞内的脂肪生成减少。(5)橙皮苷被首次发现可抑制线虫的脂肪积累,这种抑制作用可能是通过下调硬脂酰辅酶A脱羧酶FAT-6和FAT-7基因表达来实现的。上述的实验结果首先促成本实验提出了一个川陈皮素调节3T3-L1细胞内脂肪生成的信号途径模型,即:川陈皮素通过PI3K/Akt信号途径调节3T3-L1细胞内脂肪生成。该信号模型的建立不仅增加了有关川陈皮素的脂肪生成调节作用的理解,而且还为未来的抗脂肪积累研究提供了理论上的新思路。另外,橙皮苷被发现可减少线虫体内的脂肪生成,FAT-6和FAT-7基因可能在橙皮苷的抑制脂肪生成作用中扮演重要的角色。
【图文】：

细胞,图片,脂肪细胞,脂滴

细胞具有白色脂肪细胞的特点：大的脂滴和由于被脂滴挤压而导致的偏也的细胞核逡逑ＵＷｌ，本研究所拍的图片也证实了上述特点（见图１．７）。逡逑当３Ｔ３－Ｌ１细胞被单层贴壁培养或者用甲基纤维素稳定在培养皿表面悬浮培养逡逑时，随着细胞进入到静止状态，细胞开始在胞浆里积累脂肪而成为脂肪细胞，未积逡逑累脂肪的成纤维细胞又叫前脂肪细胞。这些自然的脂肪细胞转换的效率是不高的，逡逑为了获得高效的脂肪转换，在细胞培养基里添加高浓度的血清（２０－３０％）是最初的逡逑方法，在这种培养条件下得到的脂肪细胞具备上述的白色脂肪细胞的特点，另外，逡逑还可在细胞培养皿的表面看到合成的胶原，很难确定送些胶原是否为分化的细胞逡逑所合成的，因为在培养皿里仍旧存在着一些贴壁的未分化细胞，这些细胞具有合成逡逑

脂肪生成,脂肪含量,效应

组合被拆分为各组分单独或两两配伍，其中每一种诱导方式都联合ＮＯＢ。３Ｔ３－Ｌ１细逡逑胞在这些不同的细胞培养成分条件下被诱导培养２天后，胞浆内的脂肪被提取并定逡逑量。结果显示（见图３．４邋Ａ－Ｆ）：相比空白对照组，旧ＭＸ联合ＤＥＸ，膜岛素联合旧ＭＸ逡逑和膜岛素联合ＤＥＸ均提升了脂肪的积累（ｐ＜０．０５），，说明这些组合方式都具有促进逡逑３Ｔ３－Ｌ１细胞分化的作用，和已经报道的结果相符；更重要的是，在上述Ｈ种两两组逡逑合方式中，只在含有旧ＭＸ的组合ａＳＭＸ＋ＤＥＸ和旧ＭＸ＋ｉｎｓｕｌｉｎ）中，相应的ＮＯＢ逡逑处理组（５０＾ｌＭ）显著下调了脂肪含量（ｐ＜０．０５），提示ＮＯＢ和曲ＭＸ的联合可能导逡逑致了细胞内的脂肪含量减少。然而，有趣的是，ＮＯＢ和单独的Ｈ种诱导剂成分姐合逡逑培养３Ｔ３－Ｌ１细胞，相比各自的对照组，ＮＯＢ都上调了细胞浆里的脂肪含量（ｐ＜０．０５），逡逑提示ＮＯＢ可能不通过旧ＭＸ的信号通路降低脂肪细胞的脂肪含量。逡逑为了进一步验证旧ＭＸ的信号是否参与了邋ＮＯＢ的下调脂肪生成作用，旧ＭＸ信逡逑号的选择性阻断实验被采用。己经知道旧ＭＸ能够提高细跑内的ＣＡＭＰ水平
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285

【参考文献】