两株华南毛蕨内生真菌及苦玄参抗菌活性成分的研究

发布时间：2020-04-15 07:38

【摘要】：药用植物及其内生真菌作为一类具有巨大开发潜力的资源,现已成为国内外研究者发掘新型天然抗生素的主要来源。本文以民间传统药用植物苦玄参和药用植物华南毛蕨内生真菌作为研究对象,对苦玄参的化学成分及华南毛蕨内生真菌的次级代谢产物进行了系统的研究,并对部分化合物进行了抑菌活性测定,为开发新型抗菌药物提供新的资源。研究内容主要包括:本文第一章首先对耐药菌及其抗生素的研究现状进行了介绍,接着讲述了药用植物苦玄参和华南毛蕨的化学成分及其药理活性的研究,最后综述了近些年植物内生真菌及其次级代谢产物的多样性以及在抗菌活性方面的研究概况。本文第二章对传统中药苦玄参的乙酸乙酯提取物进行研究,运用硅胶、凝胶Sephadex LH20柱色谱以及重结晶等手段从中分离得到6个已知化合物,通过理化性质和NMR技术鉴定了其结构,分别为28-O-acetylbetulin(PFL-1),豆甾醇(PFL-2),白桦脂醇(PFL-3),苦玄参苷IA(PFL-4),苦玄参酮I(PFL-5),苦玄参苷元VI(PFL-6)。其中化合物PFL-1和PFL-2为首次从苦玄参中分离得到。本文第三章采用组织块法对药用植物华南毛蕨内生真菌进行分离,从其根、茎、叶及根状茎中共获得40株内生真菌。以敏感型金黄色葡萄球菌、耐药型金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌作为测试菌,运用琼脂扩散法对全部内生真菌菌株进行抑菌活性的初步筛选,对具有抑菌活性的菌株进行微量发酵,通过薄层层析分析其代谢产物,从中选取两株代谢产物最为丰富的菌株CYC17和CYC38作为目标菌株。本文第四章对采用液体培养基发酵的内生真菌菌株CYC17的乙酸乙酯提取物进行系统的分离,通过硅胶柱色谱、凝胶Sephadex LH20和重结晶等分离技术共获得7个已知化合物,利用NMR和MS等波谱学方法,鉴定为5-羟甲基-2-呋喃醛(CYC17-1),啤酒甾醇(CYC17-2),1-(4-羟基苯基)-2-氨基乙醇(CYC17-3),4-甲基苯甲醛(CYC17-4),二十五碳酸单甘油酯(CYC17-5),4-氨基苯甲醛(CYC17-6),N-乙基苯胺(CYC17-7)。其中化合物CYC17-3为首次从植物内生真菌中分离到,化合物CYC17-4,CYC17-6和CYC17-7为新的天然产物。本文第五章对采用大米培养基发酵的内生真菌菌株CYC38的乙酸乙酯提取物进行化学成分的分析,利用硅胶柱层析、凝胶Sephadex LH20等技术共分离到4个化合物,通过现代波谱学技术对其结构进行表征,分别为啤酒甾醇(CYC38-1),环-(甘-苯丙)-二肽(CYC38-2),4-(2-羟乙基)-苯酚(CYC38-3),环-(脯-N-甲基苯丙-缬-异亮-丙)-五肽(CYC38-4),其中化合物CYC38-4为新化合物。本文第六章采用微量二倍稀释法对部分化合物进行抑菌活性测定,以敏感型金黄色葡萄球菌、耐药型金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、痢疾杆菌、沙门杆菌、大肠埃希菌和伤寒杆菌七种病原菌作为指示菌,结果表明化合物PFL-3、PFL-4、CYC17-2、CYC17-3、CYC38-2、CYC38-3和CYC38-4对痢疾杆菌均表现出一定的抑制活性;化合物PFL-6对大肠埃希菌和伤寒杆菌显示抑制作用;新化合物CYC38-4对伤寒杆菌表现出明显的抑制效果;化合物PFL-4、PFL-5、PFL-6和新化合物CYC38-4不仅对敏感型金黄色葡萄球菌有抑制作用,而且对耐药型金黄色葡萄球菌也表现出抑制作用。
【图文】：

菌落形态,内生真菌,显微图,菌落形态

图 3-1 部分华南毛蕨内生真菌的菌落形态及显微图Fig. 3-1 The colony and microstructures of some endophytic fungi from Cyclosorus parasiticus3.2 抑菌活性菌株的筛选结果实验结果显示，，在这 40 株华南毛蕨内生真菌中，仅有 19 个菌株对一种或多种细有抑制活性，占全部菌株总数的 47.5%（见表 3-4）。其中对大肠埃希菌表现出抑制用的菌株有 18 个，对敏感型金黄色葡萄球菌有抑制效果的菌株有 13 个，对耐药型黄色葡萄球菌有抑制作用的菌株有 11 个，而对铜绿假单胞菌显示抑制活性的菌株有 10 株。在活性菌株中，95%的菌株均对大肠埃希菌有抑制活性，且抑制能力较；其中有 53%的菌株对铜绿假单胞菌有抑制作用，但抑制作用普遍较弱。

薄层色谱,内生真菌,次级代谢产物,华南

对具有抑菌活性的 19 株华南毛蕨内生真菌的微量发酵产物进行化学成分分析，通过 TLC 检测结果发现有 9 株内生真菌的次级代谢产物种类比较丰富，筛选出两株内生真菌CYC17和CYC38的次级代谢产物最为丰富，其薄层色谱显色结果见图3-2。365nm 254nm 香草醛-浓硫酸图 3-2 部分华南毛蕨内生真菌次级代谢产物的薄层层析结果Fig 3-2 The results of TLC of some endophytic fungi from Cyclosorus parasiticusCYC38CYC17
【学位授予单位】：广东药科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284

【参考文献】