贯叶连翘提取物对大鼠肝纤维化的保护作用及部分机制研究

发布时间：2020-04-15 15:41

【摘要】：目的探讨贯叶连翘提取物(Hypericum Perforatum Extract,HPE)对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化的保护作用及部分机制研究。方法48只Sprague Dawley(SD)大鼠随机分为正常组、HPE单药组(HPE灌胃)、模型组(CCl4处理)、HPE高剂量组(CCl4+HPE 100mg/kg)、HPE中剂量组(CCl4+HPE50mg/kg)和HPE低剂量组(CCl4+HPE 25mg/kg)。采用50%CCl4-花生油造模,于大鼠背部皮下注射,每周2次,共12周,正常组及HPE单药组给予等量生理盐水皮下注射。造模第二天开始灌胃给予大鼠不同剂量HPE,HPE各剂量组分别按100mg/kg、50mg/kg、25mg/kg大鼠体重给药,HPE单药组按50mg/kg大鼠体重给药,每日一次,连续12周。正常组自由饮水,模型组给予同HPE高剂量组灌胃剂量生理盐水灌胃。12周后处死大鼠,肝脾称重,计算肝脾指数;留取部分肝脏标本用于HE及Masson染色光镜下观察肝组织病理学变化;留取大鼠血清及肝组织匀浆标本,采用ELISA法检测外周血ALT、AST和TBIL含量,及肝组织HA、LN、CIV、PCⅢ含量。采用免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)检测TGF-β1、α-SMA、p Smad2、p Smad3、Smad7在各组大鼠肝组织中蛋白表达,蛋白免疫印迹(Western Blotting,WB)法进行进一步验证。结果模型组大鼠肝脾指数较正常组明显增加(P0.01),HPE(50,100mg/kg)给药组能够明显减低模型组中升高的肝脾指数(P0.05,P0.01)。正常组及HPE单药组中,HE染色和Masson染色镜下见大鼠肝细胞排列整齐,以中央静脉为中心呈放射状排列,肝小叶结构完整,大鼠肝脏基本无纤维增生,仅在少许主要血管周围见少许蓝色纤维;模型组中,HE染色和Masson染色可见肝细胞排列紊乱,结构改变,多数肝细胞肿胀,伴有炎性浸润及灶状坏死,可见假小叶形成,大量蓝色纤维增生,中心静脉处明显,可见纤维增生分割肝组织。结合肝脾指数及肝脏病理光镜下改变,大鼠肝纤维化模型建立成功。给药后,HPE(50,100mg/kg)剂量组肝脏病理改变较模型组明显改善,细胞肿胀、坏死较模型组明显好转,纤维增生较其明显减少。与正常组比较,HPE单药组血清ALT、AST、TBIL含量,肝组织中HA、LN、CIV、PCⅢ含量以及肝组织中TGF-β1、α-SMA、p Smad2、p Smad3、Smad7蛋白表达差异均无统计学意义;模型组血清ALT、AST、TBIL含量明显升高(P0.01),肝组织中HA、LN、CIV、PCⅢ含量明显升高(P0.01),肝组织中TGF-β1、α-SMA、p Smad2、p Smad3蛋白表达均显著升高,Smad7蛋白表达显著下降(P0.01)。与模型组比较,HPE明显降低血清ALT、AST、TBIL含量(P0.01),显著降低肝组织中HA、LN、C IV、PCⅢ含量(P0.01),能够下调肝组织中TGF-β1、α-SMA、p Smad2、p Smad3蛋白表达,上调Smad7蛋白表达(P0.01)。结论预防性给予HPE可明显改善肝损伤,减轻肝脏病理损伤及纤维增生程度,发挥抗肝纤维化作用,影响TGFβ1/Smads信号通路中相关蛋白的表达,对大鼠肝纤维化有明显保护作用,机制可能与抑制TGFβ1/Smads信号传导通路有关。
【图文】：

实验大鼠肝脏大体标本Fig1.Specimensofexperimentalrats’livers.

贯叶连翘提取物对大鼠肝纤维化的保护作用及部分机制研究

肝组织HE染色(×100)
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

【参考文献】