中药藤茶的质量评价及其活性成分二氢杨梅素的代谢相关研究

发布时间：2020-04-16 09:49

【摘要】：藤茶,为葡萄科(Vitaceae)蛇葡萄属Ampelopsis Michx.的显齿蛇葡萄Ampelopsis grossedentata(Hand.-Mazz)W.T.Wang,是近年来研究较多的药茶两用中药之一,可用于治疗咽喉炎、皮肤病、感冒发烧、糖尿病、解酒等。藤茶产地众多,主要分布于我国湖北、湖南、重庆、贵州、广西、福建等长江以南地区。由于各地气候、生境等条件的差异,必然导致不同产地藤茶的质量参差不一。然而,现如今不同产地藤茶的质量仍未得到系统保障及控制。其中,二氢杨梅素是其最主要的活性成分,含量可高达30%以上,具有抗氧化、抗炎、抗病原微生物、抗肿瘤、保肝、心脏保护、提高胰岛素敏感性等作用。课题组前期研究发现,二氢杨梅素生物利用度低,主要分布于胃肠道并经粪便排出。但关于其体内外代谢相关研究仍鲜有报道。因此,本文以藤茶及其活性成分二氢杨梅素为研究对象,从藤茶的质量评价、二氢杨梅素的体内代谢及其与肠道菌群的相互作用三个方面展开研究,为其药物开发及临床应用提供重要信息。由此,论文共分为三个部分:1.指纹图谱结合一测多评模式在藤茶质量评价中的应用研究本研究首先建立了不同产地藤茶HPLC指纹图谱,得到了24个主要共有峰,并对不同产地藤茶样品进行了相似度及模式识别分析,相似度结果表明不同产地的藤茶在化学成分组成上基本一致,但仍存在一定的差异;聚类分析及主成分分析结果表明可将不同产地的藤茶大致分为3大类。与此同时,我们从主要共有峰中指认了3个代表性活性成分,分别为二氢杨梅素、杨梅素及杨梅苷,并建立了一测多评法对这3种化合物进行同时测定,含量测定结果表明各批藤茶药材中二氢杨梅素、杨梅素及杨梅苷的含量存在一定的地区差异性,其中二氢杨梅素含量的地区差异尤为明显。总的来说,结合指纹图谱和一测多评法的质量评价模式已被首次成功应用于藤茶的质量评价中,定性的指纹图谱结合定量的一测多评为藤茶质量标准的提高研究提供了科学依据。2.二氢杨梅素在大鼠体内的代谢研究本研究首次采用UPLC-QTOF-MS/MS技术系统探讨了二氢杨梅素在大鼠体内的代谢产物情况。本研究首先分析总结了二氢杨梅素标准品在负离子电离模式下的质谱裂解规律,并建立了检测二氢杨梅素及其代谢物的UPLC-Q-TOF-MS/MS方法,且将其用于二氢杨梅素体内代谢物的检测中。应用该方法,我们从尿液和粪便中总共检测鉴定了8种代谢物,其中有三种(M4、M7、M8)代谢物为首次发现。由此,我们可以看出二氢杨梅素在体内主要通过还原、去羟基、还原后去羟基、甲基化、硫酸化、葡萄糖醛酸化途径进行代谢转化,且代谢产物主要集中在粪便中,其中包括6种I相和II相代谢物,经还原(M2)、去羟基(M3、M5)、还原后去羟基(M6)和甲基化(M7、M8)形成;少量存在于尿液中,其中包括4种II相代谢物,经葡萄糖醛酸化(M1)、硫酸化(M4)和甲基化(M7、M8)形成。然而,在血浆中几乎检测不到二氢杨梅素的代谢产物。本研究为阐明二氢杨梅素的体内过程提供了理论依据,并对其未来的开发及应用有一定的参考价值,也为下一部分实验的开展提供了重要科学依据。3.二氢杨梅素与肠道菌群的相互作用研究本研究首次初步探讨了二氢杨梅素与肠道菌群之间的相互作用,首先通过二氢杨梅素与肠道菌悬液体外孵育研究发现二氢杨梅素在肠道菌群作用下可发生还原、去羟基等代谢反应,其中去羟基代谢物是最主要的代谢产物。同时,为了探讨肠道菌群代谢对二氢杨梅素药代动力学性质的影响,我们对比研究了二氢杨梅素在正常和伪无菌大鼠体内的药代动力学情况,结果表明相较于正常组,伪无菌组的AUC仅略有增加,但其Cmax有显著性增加,说明肠道菌群代谢对二氢杨梅素的药代动力学过程起着重要作用。除此之外,我们运用16S r RNA测序技术检测了长期二氢杨梅素给药后肠道菌群的结构变化情况,结果表明二氢杨梅素能够显著改变肠道菌群的丰度和多样性,并能在一定程度上调节改善肠道菌群结构。本研究为今后二氢杨梅素药理作用机制的研究提供了新思路和理论支持,有利于阐明其低生物利用度高生物活性的原因,也为类似于二氢杨梅素的其他中药成分的研究提供理论和技术支持。
【图文】：

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图 1 藤茶的对照指纹图谱 1 The reference chromatogram of Ampelopsis grossedentata（Hand.-MazzW.T.Wang地藤茶指纹图谱的相似度评价

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图 2 各个藤茶样品的叠加色谱图Figure 2 The overlapping chromatograms of Ampelopsis grossedentata（Hand.-Mazz）W.T.Wang samples4.5 指纹图谱的模式识别研究
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5;R284.1

【参考文献】