豆茶决明及其有效组分木犀草苷对前脂肪细胞分化的影响

发布时间：2020-04-21 03:40

【摘要】：论文一木犀草苷对3T3-L1前脂肪细胞分化的抑制作用目的:研究木犀草苷对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响,并探讨它可能的作用机制。方法:1.选取3T3-L1前脂肪细胞作为研究对象,分别设置对照组(0μmol/L)以及5、10、20、40、80、160、320μmol/L浓度的木犀草苷给药组,采用噻唑蓝(MTT)法在24、48、72、96h时检测木犀草苷对前脂肪细胞增殖活性的影响。2.采用“鸡尾酒法”诱导前脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞,利用油红O染色观察3T3-L1前脂肪细胞成脂分化过程中的脂滴形成情况,鉴定其分化程度。3.选用不同浓度的木犀草苷(5, 20,80μmol/L)干预3T3-L1前脂肪细胞,诱导分化至第8d,采用异丙醇萃取法、甘油三酯(TG)含量测定分析不同浓度木犀草苷对3T3-L1前脂肪细胞诱导分化过程中脂质合成的影响。4.采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测木犀草苷对3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞过程中关键转录因子CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)、过氧化物酶体增殖物活化受体γ (PPARγ) mRNA表达水平。5.采用Western blot法检测木犀草苷对3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞过程中关键转录因子C/EBPα、PPARγ蛋白表达水平。结果:1.根据时效量效实验结果显示,与对照组(Oμmol/L)相比,5、10、20、40、80μmol/L浓度的木犀草苷给药组对3T3-L1前脂肪细胞的增殖不存在差异显著性(P＞0.05)。160、320μmol/L浓度的木犀草苷给药组显著抑制了细胞的增殖(P＜005)P进而减少脂肪细胞数量。2.与对照组(0μmol/L)相比,5、20、80μmol/L浓度的木犀草苷给药组呈剂量依赖性抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化,通过降低脂滴中TG含量显著性抑制脂质合成(P＜0.01)。3.在诱导分化第8d,5、20、80μ/L浓度的木犀草苷给药组中C/EBPα和PPARγ mRNA和蛋白表达水平显著性降低,与对照组(Oμmol/L)比较具有统计学意义(P0.01)。结论:1.木犀草苷可显著性抑制3T3-L1前脂肪细胞成脂分化,减少脂质积聚。2.木犀草苷抑制3T3-L1前脂肪细胞成脂分化的机制,可能是通过下调PPARγ、C/EBPα的表达来实现的。论文二豆茶决明含药血清对3T3-L1前脂肪细胞分化的抑制作用目的:考察豆茶决明含药血清对前脂肪细胞增殖过程的影响;研究豆茶决明含药血清对前脂肪细胞分化过程的影响;通过上述研究,探讨豆茶决明含药血清对脂肪细胞的作用,以期明确豆茶决明含药血清对前脂肪细胞增殖和分化过程的干预是否为豆茶决明减轻体重的机制之一,从而为肥胖的预防和治疗寻找新的理论依据。方法:1.制备豆茶决明含药血清,扩大培养3T3-L1前脂肪细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测豆茶决明含药血清(5%、10%、20%)对3T3-L1前脂肪细胞增殖过程的影响。2.采用高效液相色谱法(HPLC)对豆茶决明含药血清中木犀草苷含量进行测定。3.采用不同浓度的豆茶决明含药血清分化培养基干预3T3-L1前脂肪细胞,诱导分化至第6d,油红O脂肪染色观察及评价细胞分化情况,异丙醇萃取法测定其对细胞脂肪积聚的影响。4.采用甘油三酯(TG)试剂盒检测不同浓度豆茶决明含药血清对3T3-L1前脂肪细胞分化过程中脂质合成的影响。5.采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测豆茶决明含药血清对3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞过程中关键转录因子CCAAT增强子结合蛋白(C/EBPβ、C/EBPα)、过氧化物酶体增殖物活化受体γ (PPARγ) mRNA表达水平。6.采用Western blot法检测豆茶决明含药血清对3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞过程中关键转录因子C/EBPβ、C/EBPα、PPARγ蛋白表达水平。结果:1.豆茶决明含药血清中含有0.16%的木犀草苷成分。2.与对照组(Control)相比,豆茶决明含药血清(5%、10%、20%)对3T3-L1前脂肪细胞增殖无显著性影响(P＞0.05)。3.采用“鸡尾酒法”成功诱导前脂肪细胞成脂分化为成熟脂肪细胞,采用油红O染色进行鉴定。豆茶决明含药血清(5%、10%、20%)干预前脂肪细胞,分化后胞浆中脂滴数量显著性降低。脂滴中TG含量显著性下降(P＜0.05)。4.与对照组(Control)相比,豆茶决明含药血清(5%、10%、20%)干预前脂肪细胞,分化后C/EBPβ、C/EBPα、PPARγ mRNA和蛋白表达显著性降低(P＜005)。结论:1.豆茶决明含药血清能够减少脂肪细胞分化过程中脂质的积聚,抑制脂肪细胞的分化。2.豆茶决明含药血清对3T3-L1前脂肪细胞分化的抑制作用,可能与其降低C/EBPβ、C/EBPα和PPARγ mRNA和蛋白表达有关。3.豆茶决明含药血清对3T3-L1前脂肪细胞分化的抑制作用的主要成分之一来源于木犀草苷。
【图文】：

豆茶 决 明及 其 有效 组 分木 犀 草苷 对 前 脂肪 细 胞分 化 的影 响 实 验 结 果1．3T 3 - L1 前 脂肪 细胞 分 化 应用 CK X 4 1 倒置 生物 显 微 镜 观察 ， 前 体脂 肪 细胞 具有 成 纤 维 细胞 样 形 态 ，呈 多 角 形或 梭 形 (图 1- 1A ) 。当 细胞 达到 1 00 % 融汇 度时 ， 细胞 进 入 到 生长 抑 制期 ，细 胞 之 间 紧密 连 接， 这时 达 到成 脂分 化 的前 提 条件 ( 图 1 - 1B 和 1- 1C ) 。 诱 导分 化 开始 后， 细 胞 间 隙逐 渐变 大 ，细 胞 形 态 改变 呈 圆形 或椭 圆 形 ， 细 胞 内 开始 出现 脂 滴积 聚( 图 1- 1 D) ；随 着 脂滴 变 大， 成 熟的 脂 肪细 胞数 目 增多 ( 图 1- 1E ) ； 形成 “戒 环 ” 经典 脂肪 细 胞表 型 ( 图 1 - 1F ) 。A B C

与 Co nt r o l 组比 较， * P< 0 . 05 * *P < 0 .0 1 图 1- 2 木犀 草苷 对 3T 3 - L1 前 脂肪 细 胞增 殖 的影 响 Fi g. 1- 2 Ef f e c t s of l ut eo l os id e on t he p r ol i fe r a ti on o f 3T 3 - L1 p r e a d ip o c yt es 3． 木犀 草苷 对 脂质 形 成 的影 响 OR O 实验 结果 显 示， 与 对照 组 ( Co nt r ol ) 相比 ，DM SO 组 显著 性下 降 ，说明 造模 成 功 ， 3T 3 - L1 前脂 肪 细胞 已 分化 为 成熟 脂 肪细 胞 。 木 犀草 苷 给药 组 ( 5、 20 、 80 μ m o l /L ) 所含 红 色“ 戒 环” 样 脂滴 数 目较 对 照组 ( Co n t ro l， 0 μm o l /L 木 犀草 苷 ) 明显 减少 ( 图 1- 3) 。 对脂 质 含量 的 定量 结果 表 明木 犀 草苷 给 药组 ( 5、 20 、8 0 μm o l /L ) 脂 质含 量 较对 照 组显 著 降 低 ( 86 . 0% v s 10 0 %； 7 9. 3 % vs 1 00 % ；6 9 . 8% vs 10 0 % ) (图 1 - 4) ， 与 OR O 结果 一致 ， T G 含量 分别 降 低 25 .7 % 、 2 6 .7 % 和 32 .2 % ( 图 1- 5) 。脂 质含 量 和 TG 含量 的 减少 均 表明 木 犀草 苷 可显 著 性抑 制 前 脂肪 细 胞 分化 。
【学位授予单位】：辽宁中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

【参考文献】

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1 杨楚枫;杨洋;张s，

本文编号：2635317