钩吻素子抗糖尿病性神经病理性疼痛脑内机制的初步分析

发布时间：2020-04-24 11:05

【摘要】：目的:在链脲佐菌素(streptozocin)诱导的大鼠糖尿病性神经病理性疼痛(diabetic neuropathic pain,DNP)模型上,观察钩吻素子(koumine,KM)抗糖尿病性神经病理性疼痛作用及其特点,为KM可能用于防治DNP提供实验依据;进而探讨KM抗DNP作用与脑组织前额叶皮质和杏仁核星形胶质细胞活化程度、促炎细胞因子水平以及神经甾体别孕烯醇酮水平的关系,初步分析KM抗DNP作用的脑内可能机制,以期为KM防治DNP可能的临床应用提供理论基础,并有助于深化理解DNP发生的中枢机制。方法:⑴一次性腹腔注射链脲佐菌素70 mg/kg诱导DNP大鼠模型;实验大鼠随机分为对照组、模型组以及模型鼠KM处理组(KM-0.28mg/kg、KM-1.4mg/kg、KM-7.0mg/kg)和阳性对照组(加巴喷丁组100 mg/kg);建模成功后第22天开始灌胃给药,1天1次,连续8天,以机械痛阈为指标,观察KM对DNP大鼠的镇痛作用及其特点。⑵行为学实验结束后,大鼠灌注固定,取脑,免疫组织化学法观测大鼠前额叶皮质和杏仁核星形胶质细胞特征性标记物(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫阳性反应情况;行为学实验结束后,大鼠取脑,分离出前额叶皮质和杏仁核,蛋白质分子印迹法测定GFAP的水平。⑶酶联免疫吸附法测定大鼠前额叶皮质和杏仁核促炎细胞因子TNF-a与IL-1β的水平;酶联免疫吸附法测定大鼠前额叶皮质和杏仁核神经甾体别孕烯醇酮的水平。结果:⑴KM可显著提高模型鼠机械痛阈,作用呈剂量依赖性和时间依赖性,且停药后,效应仍可维持80 h以上,提示灌胃给予KM具有显著抗DNP效应。⑵荧光免疫组织化学结果显示,模型组大鼠前额叶皮质和杏仁核较对照组其GFAP荧光光密度增强、阳性细胞数量增多、胞体较大,呈激活型;模型鼠经KM处理后其前额叶皮质和杏仁核GFAP荧光光密度减弱、阳性细胞数量减少,细胞形态趋向静止型。蛋白分子印迹结果显示,模型组大鼠较对照组其前额叶皮质和杏仁核GFAP水平上升;KM可显著对抗模型鼠前额叶皮质和杏仁核GFAP水平上升。⑶酶联免疫吸附试验结果显示,模型组大鼠较对照组其前额叶皮质和杏仁核TNF-a与IL-1β水平均升高;KM可显著拮抗DNP样大鼠前额叶皮质和杏仁核TNF-a与IL-1β水平升高。⑷酶联免疫吸附试验结果显示,模型组大鼠前额叶皮质和杏仁核别孕烯醇酮水平较对照组未有显著变化,而KM可显著上调模型鼠前额叶皮质和杏仁核的别孕烯醇酮水平。结论:1.灌胃给予钩吻素子具有显著的抗DNP作用。2.钩吻素子抗DNP作用可能与其抑制模型鼠前额叶皮质和杏仁核星形胶质细胞活化、降低促炎细胞因子TNF-a和IL-1β水平、提高别孕烯醇酮水平有关。
【图文】：

图 1 大鼠前额叶皮质与杏仁核取材位置（冠状切面）Brain sites from where the tissue samples were extractertex (A) and the amygdale tissue (B). The numbers refer base on Charles Watson and George Paxinos, 2007.取：每 100 mg 组织加入含 PMSF 的 RIPA 裂解液 1 ml，，下 13000 rpm 离心 30 min，取上清液，-80 ℃保存待测 试剂盒和所需试剂及待测样品需放室温复温后开始测定液和洗涤缓冲液。 测定前额叶皮质、杏仁核 TNF-α水平准溶液：取400 μl样品稀释液加入标准品粉末中配成100。取100 μl标准品母液，加400 μl样品稀释液配成溶度为μl 加 400 μl 样品稀释液逐个倍比稀释，获得系列标准溶

KM对链脲佐菌素诱导的DNP大鼠机械痛敏的影响
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

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