补肾健脾活血方干预废用性肌萎缩的作用机制研究

发布时间：2020-04-26 02:22

【摘要】：目的:探讨补肾健脾活血方干预大鼠废用性肌萎缩的作用及可能的机制。材料与方法:SPF级2月龄wistar雌性大鼠40只,体重(240~260)g,适应性喂养一周后,按体重随机分层的方法分组,分别为空白对照组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组,每组各8只大鼠。除正常组外各组均给予尾悬吊造模处理,造模同时根据人和大鼠体表面积比进行临床等剂量换算后灌胃给药:补肾健脾活血方低、中、高剂量组给予等体积相应浓度的补肾健脾活血方混悬液灌胃,空白对照组和模型组给予与给药组等体积的蒸馏水灌胃。每日灌胃一次,第28d灌胃2h后,称重,腹腔注射麻醉,腹主动脉取血,静置2h后,离心(2500rpm,4℃,20min),收集血清,进行分装,置于-80℃冰箱保存,分离大鼠后肢比目鱼肌,称重后,左后肢比目鱼肌置于4%多聚甲醛固定,右后肢比目鱼肌置于-80℃冰箱保存。对各组大鼠体重、比目鱼肌进行称重,计算各组大鼠肌肉湿重体重比;ELISA法检测血清中肌肉生长抑制素(MSTN)含量的表达;HE染色比较各组大鼠比目鱼肌肌肉横截面肌纤维数目,观察细胞核聚集情况;Western blotting法检测比目鱼肌肌肉组织中蛋白激酶B(AKT),叉头蛋白转录因子(FOXO1),SMAD蛋白3(SMAD3)肌环指蛋白(Mu RF1),萎缩素第一型基因(Atrogin-1)蛋白的表达。结果:1.补肾健脾活血方对废用性肌萎缩大鼠比目鱼肌肌肉湿重体重比的影响与空白对照组相比,模型组大鼠比目鱼肌肌肉体重比明显下降(P0.01);与模型组相比,补肾健脾活血方低、中、高剂量组大鼠比目鱼肌肌肉体重比有所增加(P0.05);与补肾健脾活血方中剂量组相比,补肾健脾活血方低剂量组与补肾健脾活血方高剂量组大鼠比目鱼肌肌肉体重比均无明显差异(P0.05),但是随着补肾健脾活血方药物浓度的增加,补肾健脾活血方低、中、高剂量组大鼠比目鱼肌肌肉湿重体重比呈现逐渐升高的趋势。2.补肾健脾活血方对废用性肌萎缩大鼠比目鱼肌肌纤维数目和细胞核聚集情况的影响相同放大倍数条件下,与空白对照组相比较,模型组大鼠肌纤维横截面明显减小,肌纤维密度显著增加,肌纤维之间的筋膜横截面显著增大,肌束之间的筋膜横截面明显减小,细胞核高度聚集;与模型组相比,补肾健脾活血方低、中、高剂量组肌纤维横截面均明显增大,肌纤维密度均显著降低,肌束之间的筋膜的横截面均明显增大,细胞核聚集程度均下降;随着补肾健脾活血方低、中、高剂量中药浓度的增加,肌纤维横截面增大的程度逐渐增加,肌纤维密度降低的程度也逐渐增加,肌束之间的筋膜的横截面的增大越来越明显,细胞核聚集程度下降也越来越显著。3.补肾健脾活血方通过调控TGF-β/myostatin信号通路干预废用性肌萎缩3.1补肾健脾活血方对废用性肌萎缩大鼠血清中肌肉生长抑制素(MSTN)含量的影响与空白对照组相比,模型组大鼠血清MSTN含量明显增多(P0.01);与模型组相比,补肾健脾活血方低、中、高剂量组大鼠血清MSTN含量有均下降,其中补肾健脾活血方低剂量组表达下降(P0.05),补肾健脾活血方中、高剂量组表达显著下降(P0.01),与补肾健脾活血方中剂量组相比,补肾健脾活血方低剂量组和补肾健脾活血方高剂量组大鼠血清MSTN含量表达均没有显著性差异(P0.05)。3.2补肾健脾活血方对废用性肌萎缩大鼠比目鱼肌中Smad3蛋白表达的影响与空白对照组相比,模型组大鼠比目鱼肌中Smad3蛋白表达量降低(P0.05);与模型组相比,补肾健脾活血方低剂量组大鼠比目鱼肌中Smad3蛋白表达量升高不明显,无显著差异(P0.05),补肾健脾活血方中剂量组和高剂量组大鼠比目鱼肌中Smad3蛋白表达明显升高,差异具有统计学意义(P0.01),且随着药物剂量浓度的增加,Smad3蛋白表达量呈逐步升高的趋势;与补肾健脾活血方中剂量组相比,补肾健脾活血方低剂量组大鼠比目鱼肌中Smad3蛋白表达明显减少(P0.01),补肾健脾活血方高剂量组Smad3蛋白表达量明显增加(P0.01)。3.3补肾健脾活血方对废用性肌萎缩大鼠比目鱼肌中Akt蛋白表达的影响与空白对照组相比,模型组大鼠比目鱼肌中Akt蛋白表达量降低(P0.05);与模型组相比,补肾健脾活血方低、中、高剂量组大鼠比目鱼肌中Akt蛋白表达量均升高(P0.05),与补肾健脾活血方中剂量组相比,补肾健脾活血方低剂量组大鼠比目鱼肌中Akt蛋白表达量显著减少(P0.01),补肾健脾活血方高剂量组大鼠比目鱼肌中Akt蛋白表达量没有显著性差异(P0.05)。3.4补肾健脾活血方对废用性肌萎缩大鼠比目鱼肌中FOXO1蛋白表达的影响与空白对照组相比,模型组大鼠比目鱼肌中FOXO1蛋白表达量升高(P0.05)。与模型组相比,补肾健脾活血方低剂量组大鼠比目鱼肌中FOXO1蛋白表达量降低(P0.05),补肾健脾活血方中剂量和高剂量组大鼠比目鱼肌中FOXO1蛋白表达量均显著降低(P0.01);与补肾健脾活血方中剂量组相比,补肾健脾活血方低剂量和高剂量组大鼠肌肉中FOXO1蛋白表达量均没有明显差异,但是补肾健脾活血方低、中、高剂量组大鼠肌肉中FOXO1蛋白表达量具有逐渐降低的趋势。4.补肾健脾活血方通过调控泛素蛋白酶体途径干预废用性肌萎缩4.1补肾健脾活血方对废用性肌萎缩大鼠比目鱼肌中Mur F-1蛋白表达的影响与空白对照组相比,模型组大鼠比目鱼肌中Mur F-1蛋白表达量升高(P0.05)。与模型组相比,补肾健脾活血方低剂量组大鼠比目鱼肌中Murf1蛋白表达量降低(P0.05),补肾健脾活血方中剂量组和高剂量组大鼠比目鱼肌中Murf1蛋白表达量显著降低(P0.01);与补肾健脾活血方中剂量组相比,补肾健脾活血方高剂量组大鼠比目鱼肌中Murf1蛋白表达量升高(P0.05)。4.2补肾健脾活血方对废用性肌萎缩大鼠比目鱼肌中MAFbx蛋白表达的影响与空白对照组相比,模型组大鼠比目鱼肌中MAFbx蛋白表达升高(P0.05)。与模型组相比,补肾健脾活血方低剂量组大鼠比目鱼肌中MAFbx蛋白表达量降低(P0.05),补肾健脾活血方中剂量组和高剂量组大鼠比目鱼肌中MAFbx蛋白表达量均显著降低(P0.01);与补肾健脾活血方中剂量组相比,补肾健脾活血方低剂量组和高剂量组大鼠比目鱼肌中MAFbx蛋白表达量均没有明显差异(P0.05),但随着补肾健脾活血方药物浓度的增加大鼠肌肉中MAFbx蛋白表达量呈逐渐降低的趋势。结论:1.补肾健脾活血方对废用性肌萎缩具有干预作用。2.补肾健脾活血方干预废用性肌萎缩的可能作用机制之一是与该方调控TGF-β/myostatin信号通路以及泛素蛋白酶体途径有关,体现出该方的多靶点作用机制。
【图文】：

- 18 -图1 各组大鼠比目鱼肌与体重比注：A：空白对照组 B：模型组 C：补肾健脾活血方低剂量组 D：补肾健脾活血方中剂量组 E：补肾健脾活血方高剂量组2.补肾健脾活血方对废用性肌萎缩大鼠比目鱼肌肌纤维数目和细胞核聚集情况的影响相同放大倍数条件下，与空白对照组相比较，模型组大鼠肌纤维横截面明显减小，肌纤维密度显著增加，肌纤维之间的筋膜横截面显著增大，肌束之间的筋膜横截面明显减小，，细胞核高度聚集；与模型组相比，补肾健脾活血方低、中、高剂量组肌纤维横截面均明显增大，肌纤维密度均显著降低，肌束之间的筋膜的横截面均明显增大，细胞核聚集程度均下降；随着补肾健脾活血方低、中、高剂量中药浓度的增加，肌纤维横截面增大的程度逐渐增加，肌纤维密度降低的程度也逐渐增加，肌束之间的筋膜的横截面的增大越来越明显，细胞核聚集程度下降也越来越显著。结果见

- 19 -图2 各组大鼠比目鱼肌肌肉横切面HE染色结果（400×）注：A:空白对照组 B:模型组 C:补肾健脾活血方低剂量组 D:补肾健脾活血方中剂量组 E:补肾健脾活血方高剂量组
【学位授予单位】：辽宁中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

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本文编号：2640972