五脏温阳化瘀汤治疗血管性痴呆大鼠的机制研究

发布时间：2020-04-25 23:55

【摘要】：血管性痴呆(Vasulardementia,VD)是血管源因素所致的后天获得性智能损害综合征,临床表现为记忆力、认知力、情绪与行为等一系列异常改变。近年来,VD的发病率逐年上升。现代医学对VD具体发病机制至今尚不明确,因而无特效的治疗手段,传统中医药在VD的预防和治疗中具有明显的优越性。本研究主要通过Morris水迷宫、HE染色、WB、PCR及蛋白组学,阐明五脏温阳化瘀汤治疗VD的效应机制。研究分为2个部分:中医理论研究主要阐述了中医对血管性痴呆病因病机与诊断和治疗的认识,唐农教授学术思想研究,脑的功能与五脏的关系;立足于内阳外阴的阴阳本体结构理论来解读血管性痴呆的病机和治疗。实验研究目的:复制血管性痴呆大鼠模型,观察五脏温阳化瘀汤干预血管性痴呆大鼠的学习和记忆能力及海马病理学变化,研究五脏温阳化瘀汤对PI3K/Akt/m TOR信号通路及BCL-2、BCL-XL、Caspase-9、Caspase-3凋亡蛋白的影响,研究五脏温阳化瘀汤对相关蛋白表达的影响,鉴定差异蛋白表达,探讨五脏温阳化瘀汤干预VD的效应机制。方法:(1)购买健康的雄性SPF级SD大鼠,采用反复夹闭双侧颈总动脉再灌注法复制血管痴呆大鼠模型,假手术组只予切开分离颈总动脉,不夹闭动脉,给予缝合。随后随机分为假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组、西药组一共5组;连续灌药14天,再次进行Morris水迷宫实验后,全部大鼠取材。(2)采用HE染色,观察海马组织神经元形态学变化;(3)采用WB、PCR检测PI3K/Akt/m TOR信号通路及BCL-2、BCL-XL、Caspase-9、Caspase-3凋亡蛋白的表达,研究五脏温阳化瘀汤对相关蛋白表达的影响。(4)采用应用iTRAQ/TMT标记结合液相色谱-质谱联用技术进行蛋白质组学研究,鉴定差异蛋白,判断五脏温阳化瘀汤对VD大鼠相关蛋白的影响。结果:(1)在Morris水迷宫实验中:与假手术组相比,模型组潜伏期明显延长,跨越平台次数明显减少,表明其学习与记忆能力下降,差异具有统计学意义(P0.01);与模型组比较,治疗各组潜伏期缩短,跨越平台次数增加,表明学习与记忆能力有所回升,差异均具有统计学意义(P0.05);与西药组比较,低剂量组大鼠的学习和记忆能力与西药组差异无统计学意义(P0.05),高剂量组的学习和记忆能力优于西药组,差异具有统计学意义(P0.05);与低剂量组比较,高剂量组学习和记忆能力优于低剂量组,差异具有统计学意义(P0.05);五脏温阳化瘀汤高剂量组的治疗效果最好。(2)海马组织HE染色显示:相较于模型组,五脏温阳化瘀汤治疗组大鼠海马组织病理损害得到改善,中药高剂量组的作用较为显著。(3)WB、PCR结果显示:与空白组相比,模型组PI3K、Akt、m TOR、BCL-2、BCL-XL、Caspase-9、Caspase-3表达量差异具有统计学意义。与模型组比较,中药高剂量组与西药组PI3K、Akt、m TOR、BCL-2和BCL-XL表达量均上调,中药高剂量组与西药组Caspase-9、Caspase-3表达下调,差异具有统计学意义(P0.05)。与西药组相比,低剂量组的PI3K、Akt、m TOR、BCL-2、BCL-XL、Caspase-9、Caspase-3表达量差异具有统计学意义(p0.05);高剂量组的PI3K、Akt、m TOR、BCL-2、BCL-XL、Caspase-9、Caspase-3表达量差异无统计学意义(P0.05)。与低剂量组比较,中药高剂量组的P I 3 K、A k t、m T O R、BCL-2、BCL-XL、Caspase-9、Caspase-3表达量差异具有统计学意义(P0.05);五脏温阳化瘀汤高剂量组与西药组治疗效应无明显差异。(4)蛋白组学结果显示:与假手术组比较,VD模型中检出的2倍以上差异蛋白(P0.05),23种上调,17种下调。与模型组比较,中药治疗组检出2倍以上差异蛋白(P0.05)中16种上调,10种下调。差异蛋白表达水平聚类显示:假手术组Cluster1区相关基因表达下调,Cluster2区Cluste4区相关蛋白表达上调;模型组Cluster1区相关蛋白表达上调,Cluster2区Cluste4区相关蛋白表达下调;中药治疗组Cluster1区相关蛋白表达下调,Cluster2区Cluste4区相关蛋白表达下调。结论:运用Morris水迷宫实验、HE染色、WB、PCR及蛋白组学研究方法,其结果表明:五脏温阳化瘀汤对VD大鼠的学习记忆能力有较为显著的改善作用,可以抑制海马神经细胞凋亡;五脏温阳化瘀汤可能通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路,使BCL-2和BCL-XL表达上调,Caspase-9、Caspase-3表达下调,从而抑制神经细胞凋亡,发挥神经保护作用;五脏温阳化瘀汤对血管性痴呆大鼠治疗效应可能是通过调控的异常蛋白的表达来实现的。
【图文】：

学习时间,大鼠

大鼠学习时间变化

跨越平台,大鼠,次数

大鼠跨越平台次数
【学位授予单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】