蒿鳖养阴软坚方通过Nrf2/γ-GCS信号通路抑制酒精性肝纤维化作用

发布时间：2024-07-09 06:00

　　目的结合体内实验和体外实验探讨不同提取方案的蒿鳖养阴软坚方对酒精性肝纤维化的作用机制,并探讨其通过激活Nrf2通路诱导下游抗氧化反应蛋白γ-GCS的表达,而抑制酒精性肝纤维化,进一步推动鳖养阴软坚方成功应用于临床,为众多酒精性肝纤维化患者提供更为健康、有效、副作用小的防治药物。本课题组结合体内、外两大实验部分,根据不同提取方案的复方给药后,分析大鼠肝组织中胶原蛋白含量,观察乙醛刺激后的LX-2细胞生长、增殖的情况,研究酒精性肝纤维化大鼠肝组织中以及乙醛刺激后的LX-2细胞中Nrf2/γ-GCS通路中主要蛋白Nrf2、γ-GCS的表达。方法1、从军事科学院购买健康Wistar大鼠体重在200²40g的共80只,雌性和雄性各占一半。每日灌胃相应浓度酒精并辅助大鼠皮下注射40%CCL4-花生油以及添加高脂饲料进行酒精性肝纤维化模型造模。将大鼠按体重随机区组分组法分为完全水提低剂量组(2.59g.kg-1.d-1)、完全水提高剂量组(8.2g.kg-1.d-1)、先水后醇95%低剂量组(2.59g.kg-1.d-1)、先水后醇95%高剂量组(8.2g.kg-1.d-1)、...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1蛋白定量标准曲线

⑦设定酶标仪波长为570nm，测定96孔板各孔的吸光度值，根据蛋白标准品浓度与所检测的OD值绘制标准曲线，并利用标准曲线及其公式，根据样品的OD值计算出样品的总蛋白浓度以及电泳上样体积。见图1。表1蛋白定量测定的标准曲线蛋白浓度(mg/mL)00.0250.050.....

图2Nrf2蛋白免疫组化染色结果(×400)

实验结果3.1体内实验结果3.1.1粉末提取方案的蒿鳖养阴软坚方对酒精性肝纤维化模型肝组织中的免疫组化的影响3.1.1.1Nrf2蛋白免疫组化染色结果ABC

图3γ-GCS蛋白免疫组化染色结果(×400)

正常组在视野范围内未见棕黄色染色，即无Nrf2蛋白表达。模型组在胞浆内均可见棕黄色染色，但胞核内未见其表达。中剂量组胞核内阳性染色分布较少，多见炎症细胞浸润。高剂量组阳性染色多数在胞核，胞浆有少量分布，间质细胞也有少量分布。秋水仙碱组在胞浆和胞核内均可见棕黄色染色，以肝细胞核....

图4肝组织羟脯氨酸Hyp标准曲线

正常组在视野范围内未见棕黄色染色，即无γ-GCS蛋白表达。模型组在胞浆内均可见棕黄色染色，但胞核内未见其表达，可见大量窦内皮细胞、间质细胞增生。粉末中、高剂量组在胞浆、胞核内均可见棕黄色染色，可见炎症细胞浸润。但两个剂量组染色差别不大。秋水仙碱组在胞浆和胞核内均可见棕黄色染色....

本文编号：4004506