部分中草药与无机盐对结核分枝杆菌生物膜的影响

发布时间：2020-04-26 06:38

【摘要】：结核病是一种由结核分枝杆菌引起的高感染性和高致死性的传染性疾病。近年来,耐药结核病尤其是耐多药结核病(MDR-TB)、广泛耐药结核病(XDR-TB)和艾滋病合并结核病(HIV-TB)的出现,给全球结核病控制带来了极大挑战。大量研究认为结核分枝杆菌能够以生物膜的形式存在,且生物膜(BF)的形成可能是引起结核分枝杆菌耐药性增加的重要机制之一。生物膜(biofilm,BF)是细菌粘附于表面时,被自身所分泌的多糖基质、纤维蛋白、脂质蛋白等包绕其中而形成的含有大量细菌膜样复合体。本实验对12种无机盐进行抗结核分枝杆菌活性与干预生物膜生长活性筛选试验,发现亚硝酸钠具有良好的抗结核分枝杆菌及抑制结核分枝杆菌生物膜生长活性,MIC值皆为4mmol/L,MBC值为8 mmol/L,且3mmol/L亚硝酸钠与3.2μg/ml利福平联合用药时,具有很好的协同抑菌与抑制生物膜生长效果。亚硝酸钠能够干预结核分枝杆菌ATP的合成,导致ATP含量降低和较弱荧光显色,这可能是其抑制结核杆菌生物膜的机制。中草药是新药发现的重要来源之一,我国中草药资源非常丰富,本实验利用贵州中草药资源的多样性,建立实验中草药样本库。先后对30种中草药进行抗结核分枝杆菌活性与干预生物膜生长活性筛选试验,发现苦参的甲醇提取物(0.4 mg/ml)能明显抑制结核杆菌H37Rv生物膜的形成,浓度提高到0.8 mg/ml时,结核杆菌可被苦参杀死。山茱萸80%乙醇提取物在3.2mg/ml具有抗结核分枝杆菌活性,进一步结果表明,在改良罗氏培养基上,山茱萸乙醇提取物小极性部位为抗结核分枝杆菌有效活性部位,山茱萸大极性部位不能明显促进结核分枝杆菌生长,但在7H9-ADC肉汤培养基培养上,能够明显促进结核分枝杆菌生物膜成膜,且呈量效关系。本实验研究结果提示,不同中草药对结核杆菌生物膜的形成存在不同的干预结果,进一步开展活性跟踪研究,将为发现干预结核杆菌生物膜的分子骨架奠定基础。本论文对结晶紫染色法评价结核分枝杆菌生物膜进行方法学优化,结果显示,在H37Rv菌悬液(10~8 CFU/ml)接种量为100μl、培养时间7天、1%结晶紫染色、染色时间15min的条件下,呈明显量效关系。
【图文】：

生物膜,结核分枝杆菌,无机盐,液面

都能够抑制结核分枝杆菌生物膜成膜（图2.1），呈量效关系，其中，NaNO2的抑制效果最为明显（表 2.5），其余样本无明显干预效果。表 2.5 12 种无机盐对生物膜的干预试验结果Table 2.5 The intervention results of 12 kinds of inorganic salts on Biofilm金属离子化合物生物膜计分5μg/ml 10μg/ml 15μg/ml 20μg/ml 25μg/mlCuSO42.8 2.3 2.1 1.5 1.2AgNO32.7 2.0 1.6 1.4 1.3NaNO22.6 2.3 1.2 1.0 0.5CaCl22.7 2.7 2.8 3.2 3.0FeSO4 2.0 2.1 2.5 2.2 2.3NaCl 2.6 2.0 2.3 2.6 2.7MgSO43.0 2.2 2.0 2.8 1.8FeCl22.6 2.5 2.4 2.3 2.4KI 2.8 2.5 3.0 2.3 2.6（NH4）2SO42.2 2.4 2.0 2.6 1.9BaCl22.5 2.2 2.0 2.8 1.8FeCl32.6 2.6 2.7 2.6 2.7阴性对照 3.2注：1) 生物膜长满液面，厚而致密，计 4 分；2) 生物膜长满液面，薄而稀疏，计 3 分；3) 生物膜长至液面的一半，计 2 分；4) 生物膜长至液面的四分之一，计 1 分；5) 不长生物膜，计 0 分。（判断标准下同）Note:1) Biofilm covered with liquid

抗结核,分枝杆菌,生物膜活性,菌落数

贵州大学硕士毕业论文表 2.7 NaNO2抗结核分枝杆菌活性实验结果Table 2.7 The tests results of NaNO2on Mycobacterium tuberculosis组别抑制结核杆菌活性1mmol/L 2mmol/L 4mmol/L 8mmol/L 16mmol/LNaNO2- - ++ +++ +++空白对照组 - - - - -注：每管菌落数低于 5 个（含 5 个）视为有效，其中菌落 0~1 个记“+++”，2~4 个记“++”，5 个记“+”，菌落数在 6 个以上视为无效，记“-”。（判断标准下同）Note: the CFU≤5 is defined as effective, 0~1 marked “+++”, 2~4 marked “++”, 5 marked“+”, and the CFU＞6 is defined asnoneffective, marked “-”.
【学位授予单位】：贵州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285

【参考文献】