基于APP囊泡转运通路探讨固本健脑法对AD模型大鼠的作用

发布时间：2020-04-26 16:31

【摘要】：目的本课题旨在从后天之本阐述固本健脑法的内涵,并运用行为学、组织切片和生物化学的研究方法探讨固本健脑法治疗AD的作用及机理,为中医药治疗AD的研究提供理论基础和实验依据。方法1.理论研究:采用文献研究方法,系统回顾中医学对老年性痴呆的认识,从先后天之本理论出发,结合团队相关研究成果,系统阐述固本健脑治则治法理论。2.实验研究:90只SPF级老年(12月龄)雄性Wistar大鼠,适应性喂养7天后,随机分为正常组、假手术组、模型组、固本健脑方高、中、低剂量组、西药组共7组。正常组不予处理,模型组和各治疗组于双侧海马CA1区注射Aβ_(1-42)制备复合AD大鼠模型,假手术组注射等量生理盐水。3天后,各治疗组用固本健脑方水煎液灌胃干预,以安理申组为对照,其余组灌服等量生理盐水。4周后,运用Morris水迷宫检测大鼠的空间学习记忆能力,Western blot法、免疫荧光法检测各组SorLA、VPS35蛋白及SorLA+VPS35共定位的表达,ELISA法检测治疗前后Aβ_(1-42)的表达,以探讨固本健脑法防治AD的作用及机制。结果1.通过大鼠双侧海马注射Aβ_(1-42),可诱导出AD样学习记忆能力减退大鼠模型。2.水迷宫检测显示固本健脑方中剂量能改善大鼠学习记忆能力。与假手术组比较,模型组学习记忆能力下降,差异有显著性(P0.01);经药物干预后,大鼠学习记忆能力有所提升,与模型组比较,各治疗组逃避潜伏期均明显缩短,穿越平台次数增加,差异有显著性(P0.05);与西药组比较,固中组逃避潜伏期缩短,穿越平台次数增加,疗效较西药组佳,差异具有显著性(P0.05)。3.用Western blot检测SorLA、VPS35蛋白的表达量,结果显示,与假手术组比较,模型组VPS35、SorLA蛋白的表达下调,差异有显著性(P0.01);经药物干预后,与模型组比较,各治疗组VPS35、SorLA蛋白的表达均上调(P0.01);与西药组比较,固中组VPS35蛋白的表达上调、固高组SorLA蛋白的表达上调(P0.05)。4.IF单标结果显示,与假手术组相比,模型组SorLA、VPS35荧光颗粒均明显减少(P0.01);与模型组比较,各治疗组的荧光颗粒较多(P0.05)。IF双标结果显示,与假手术组相比,模型组SorLA+VPS35共定位的黄色荧光颗粒较少(P0.01);与模型组比较,各治疗组黄色荧光颗粒较多(P0.05)。5.ELISA法检测给药前后Aβ_(1-42)含量,给药后各给药组Aβ_(1-42)含量降低,固本健脑方高剂量Aβ_(1-42)含量最低。结论1.固本健脑法的内涵为固先后天之本,健脑醒神,兼化痰瘀。后天脾胃虚弱可能引发痴呆的机理可能是:脾胃虚弱,五脏亏虚,脑窍失养;痰瘀阻络,蒙蔽脑窍。从脾胃论治AD丰富了固本健脑法的内涵。2.固本健脑法能改善痴呆大鼠学习记忆能力,提高痴呆大鼠认知功能。3.固本健脑法治疗痴呆的机制之一可能是通过影响囊泡转运过程中的SorLA和VPS35,从而介导更多的APP进入非淀粉样变性途径,减少Aβ的生成。
【图文】：

固本健脑法对大鼠行为学的影响

轨迹图,大鼠

大鼠游动轨迹图
【学位授予单位】：湖北民族学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5;R-332

【参考文献】