张家口地区知母药材的质量控制研究

发布时间：2020-04-28 01:26

【摘要】：知母为百合科植物知母(Anemarrhena asphodeloides Bge.)的干燥根茎,具有清热泻火,滋阴润燥的功效。知母分布全国各地,主产于河北省和山西省。河北省张家口地区知母资源丰富,但目前没有统一的质量评价标准。因此,为了用药的安全性和有效性,应对张家口地区产知母药材进行鉴别及有效成分含量测定,并建立其指纹图谱及共有模式图。为张家口地区产的知母建立一个统一的质量控制标准,具有十分重要的意义。现代药理研究表明知母中甾体皂苷类、双苯吡酮类成分能有效抑制小肠内α-葡萄糖苷酶,减小糖在小肠内的吸收面积,延后吸收时间,从而降低餐后血糖。本实验从体外研究知母提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,从知母降血糖这一药理作用方面完善对张家口地区产知母的质量评价。本实验通过比较产于张家口地区与其他地区知母在药材鉴别、水分、灰分、酸不溶性灰分、有效成分含量测定、指纹图谱、药效等方面的不同,对张家口地区产知母的质量控制进行了研究,为鉴别张家口地区产知母提供了有效方法。1.知母的鉴别不同产地的知母通过以下两种方法进行鉴别。一、从知母的性状对其进行鉴别:采用外观观察法表明,25批知母质地坚硬、内部断面颜色为黄白色、有光泽、气微、味微甜、略苦、有黏性、毛知母有须毛、知母肉没有须毛,不同产地知母没有明显的区别均符合国家药典的规定。二、照薄层色谱法(附录ⅥB)试验对其进行薄层鉴别:供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上显相同的荧光斑点。不同产地知母色谱图并没有明显区别,但其可以作为知母的定性鉴别。2.知母的水分、总灰分、酸不溶性灰分检测按照2015版《中国药典》附录通则(0832)第二法对知母进行水分测定表明,张家口地区产野生知母肉水分含量为7.77%~8.21%,平均水分含量为7.99%,种植知母肉水分含量为7.33%~8.76%,平均水分含量为8.00%。其他产地种植知母肉水分含量为8.77%~9.35%,平均水分含量为9.07%比张家口地区高1.07%。张家口地区产种植毛知母水分含量为7.32%~8.05%,平均水分含量为7.83%。其他产地种植毛知母水分含量为7.64%~9.50%,平均水分含量为8.51%比张家口地区高0.68%。均符合药典中规定的不得超过12.00%。按照2015版《中国药典》附录通则(2302)法对知母进行总灰分测定表明,张家口地区产野生知母肉总灰分含量为4.12%~5.40%,平均总灰分含量为4.67%,种植知母肉总灰分含量为5.09%~5.73%,平均总灰分含量为5.39%。其他产地种植知母肉总灰分含量为4.72%~5.98%,平均总灰分含量为5.39%。张家口地区产种植毛知母总灰分含量为3.84%~5.96%,平均总灰分含量为5.20%。其他产地种植毛知母总灰分含量为4.73%~5.67%,平均总灰分含量为5.20%。均符合药典中规定的不得超过9.00%。按照2015版《中国药典》附录通则(2302)法对知母进行酸不溶性灰分测定表明,张家口地区产野生知母肉酸不溶性灰分含量为1.35%~1.62%,平均酸不溶性灰分含量为1.47%,种植知母肉酸不溶性灰分含量为1.48%~1.64%,平均酸不溶性灰分含量为1.58%。其他产地种植知母肉酸不溶性灰分含量为1.52%~1.72%,平均酸不溶性灰分含量为1.58%。张家口地区产种植毛知母酸不溶性灰分含量为1.54%~1.78%,平均酸不溶性灰分含量为1.70%。其他产地种植毛知母酸不溶性灰分含量为1.53%~1.89%,平均酸不溶性灰分含量为1.72%。均符合药典中规定的不得超过4.00%。3.知母中总黄酮、总皂苷含量检测70%乙醇超声提取30 min,离心,取上清液,加5%亚硝酸钠溶液0.5 m L,摇匀,放置6 min,10%硝酸铝溶液0.5 m L,摇匀,放置6 min,加5%氢氧化钠溶液5 m L,70%乙醇定容至25 m L,在258 nm波长处测定吸光度值表明,张家口地区产野生知母肉总黄酮含量为3.56%~4.92%,平均总黄酮含量为4.16%,产种植知母肉总黄酮含量为2.01%~2.65%,平均酸不溶性灰分含量为2.35%。其他产地种植知母肉总黄酮含量为1.29%~3.35%,平均总黄酮含量为2.29%比张家口地区低0.06%。张家口地区产种植毛知母总黄酮含量为1.03%~4.92%,平均总黄酮含量为2.92%。其他产地种植毛知母总黄酮含量为1.57%~3.83%,平均总黄酮含量为2.88%比张家口地区低0.04%。30%丙酮超声提取30 min,离心,取上清液,然后加磷酸6.0 m L和1.0%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液2.0 m L,在60℃水浴中加热60 min后进行冰水浴冷却5 min,再加无水乙醇4.0 m L,摇匀,30%丙酮定容至25 m L,在520 nm波长处测吸光度值表明,张家口地区产野生知母肉总皂苷含量为7.42%~8.12%,平均总皂苷含量为7.74%,种植知母肉总皂苷含量为6.78%~7.58%,平均总皂苷含量为7.18%。其他产地种植知母肉总皂苷含量为6.45%~7.57%,平均总皂苷含量为6.97%比张家口地区低0.21%。张家口地区产种植毛知母总皂苷含量为6.65%~8.24%,平均总皂苷含量为7.59%。其他产地种植毛知母总皂苷含量为6.76%~8.32%,平均总皂苷含量为7.57%比张家口地区低0.02%。4.知母中新芒果苷、芒果苷含量检测采用Syncronis C18(50 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,以乙腈-水(13:87)为流动相,流速0.25 m L·min-1,检测波长258 nm,柱温35℃,进样量5μL,运行时间6 min,测得新芒果苷、芒果苷含量。结果表明,新芒果苷、芒果苷的线性范围分别为1.25~80μg·m L-1、1.875~120μg·m L-1。张家口地区产野生知母肉新芒果苷含量含量为1.44%~2.90%,平均新芒果苷含量含量为2.22%,种植知母肉新芒果苷含量为0.94%~1.65%,平均新芒果苷含量为1.28%。其他产地种植知母肉新芒果苷含量为0.49%~1.86%,平均新芒果苷含量为1.12%比张家口地区低0.16%。张家口地区产种植毛知母新芒果苷含量为0.98%~2.61%,平均新芒果苷含量为1.68%。其他产地种植毛知母新芒果苷含量为0.66%~1.88%,平均新芒果苷含量为1.29%比张家口地区低0.39%。张家口地区产野生知母肉芒果苷含量含量为1.45%~2.58%,平均芒果苷含量含量为1.73%,种植知母肉芒果苷含量为0.83%~1.20%,平均芒果苷含量为0.96%。其他产地种植知母肉芒果苷含量为0.33%~1.71%,平均芒果苷含量为0.97%比张家口地区高0.01%。张家口地区产种植毛知母芒果苷含量为0.93%~2.09%,平均芒果苷含量为1.40%。其他产地种植毛知母芒果苷含量为0.70%~1.79%,平均芒果苷含量为1.43%比张家口地区高0.03%。5.知母指纹图谱的建立采用ACQUITY UPLC?HSS T3(100 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱,以A为水,B为乙腈,按不同比例进行梯度洗脱(0~2 min,5%~20%B;2~5 min,20%~25%B;5~10 min,25%~100%B),流速0.25 m L·min-1,检测波长210 nm,柱温35℃,进样5μL,运行时间10 min条件下建立知母的指纹图谱。将10批张家口地区和5批其他地区知母进行指纹图谱研究,建立了不同产地知母的指纹图谱及共有模式图,确定16个色谱峰为15批知母的共有峰。将15批样品进行聚类分析,结果将样品分为2类,取第1类中1~11号张家口知母样品指纹图谱建立张家口地区知母指纹图谱及共有模式图,并确定20个色谱峰为11批药材的共有峰。将张家口地区指纹图谱共有模式图、15批知母样品指纹图谱进行相似度分析结果表明,1~11号样品与张家口知母指纹图谱共有模式的相似度均在0.95以上,反映出张家口知母内在整体化学结构极为相似,为人工种植提供了依据。6.知母提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用采用对硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)法研究知母提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用显示,张家口地区产野生知母肉抑制率为90.35%~95.44%,平均抑制率为91.80%,种植知母肉抑制率为73.71%~86.54%,平均抑制率为80.68%。其他产地种植知母肉抑制率为59.16%~89.86%,平均抑制率为78.80%比张家口地区低1.88%。张家口地区产种植毛知母抑制率为85.37%~93.76%,平均抑制率为90.00%。其他产地种植毛知母抑制率为81.74%~90.69%,平均抑制率为87.2%比张家口地区低2.8%。将知母各组分对α-葡萄糖苷酶的抑制率进行相关性分析,结果显示知母中芒果苷和总皂苷成分对α-葡萄糖苷酶具有良好的抑制作用,而知母中新芒果苷成分对α-葡萄糖苷酶没有明显的抑制作用。因此,芒果苷可作为知母的质量标志物(Q-Marker),有助于建立知母的全程质量控制及质量溯源体系。
【学位授予单位】：河北北方学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R284.1

【参考文献】