升阳益胃汤对PLGC模型大鼠胃黏膜P16及野生型P53基因和蛋白表达的影响

发布时间：2020-04-28 07:49

【摘要】：目的:通过观察升阳益胃汤对胃癌前病变(PLGC)模型大鼠微血管密度(MVD)及抑癌基因P16与野生型P53基因和蛋白表达的影响,分析升阳益胃汤改善胃黏膜病理状态的机理,探讨其对PLGC干预与治疗的分子生物学机理,为临床拓展升阳益胃汤在相关领域的应用提供实验与理论基础。方法:将96只SPF级Wistar大鼠按随机数字表法分为空白组、模型组,维酶素组、和升阳益胃汤高、中、低剂量组,每组16只,除空白组,其余各组大鼠予浓度为150μg·mL~(-1)MNNG溶液,避光自由饮用,同时将雷尼替丁溶于60℃浓盐水2.25g·L~(-1)灌胃,每日一次,剂量为1mL·100g~(-1)连续12周,成功复制PLGC模型,于第12周开始分别予维酶素组与升阳益胃汤高、中、低剂量组以维酶素悬浮液与不同浓度升阳益胃汤浓缩液灌胃,一日一次,空白组与模型组以等体积生理盐水灌胃,一日一次,连续6周,第18周末禁食24h,予水合氯醛麻醉处死取材,行苏木素伊红染色(HE染色)观察胃黏膜病理状况,免疫组化法检测CD34以观察胃黏膜微血管密度情况,免疫组化法检测胃黏膜P16与野生型P53蛋白的表达情况,采用实时荧光定量PCR法检测胃黏膜P16与野生型P53的转录水平,采用免疫组化法检测胃黏膜P16与P53的相对表达量。结果:1、各组大鼠的一般状态变化空白组大鼠饮食正常,精神状态良好,皮毛光泽,体重正常,大便成灰白色颗粒状。与空白组大鼠相比较,模型组大鼠饮食减少,精神状态较差,喜扎堆,皮毛粗糙,体重增长缓慢,体形瘦小,大便不成形,垫料较空白组大鼠异味较重。各药物组大鼠饮食较模型组大鼠好转,活动度增加,大便逐渐恢复颗粒状,垫料异味减轻。2、各组大鼠胃黏膜病理状态改变空白组大鼠胃黏膜厚度正常,胃黏膜上皮细胞呈单层柱状,胞浆透明或呈小空泡状,与腺管分界清楚,腺管排列整齐,大小形状一致;与空白组相比较,模型组胃黏膜上皮萎缩变薄,腺体数量减少,间质内有炎性细胞浸润,红细胞增多,腺体结构不规整,核浆比例增大,个别腺体出现囊状扩张;与模型组相比较,各治疗组腺体结构较规则,炎性细胞浸润减少,腺体数量逐渐增多,胃黏膜病理状态有向愈趋势,其中以升阳益胃汤高剂量组最为明显。3、各组大鼠MVD改变与空白组大鼠相比,模型组微血管密度数明显减少,差异具有统计学意义(P0.01);与模型组大鼠相比较,维酶素组与升阳益胃汤中剂量组组微血管数增多,差异具有统计学意义(P0.05),升阳益胃汤高剂量组微血管数明显增多,差异具有统计学意义(P0.01),药物低组微血管数的变化差异性不显著(P0.05)4、免疫组化检测各组大鼠P16、野生型P53蛋白表达情况与空白组相比,模型组大鼠P16、P53蛋白表达量明显降低,差异具有统计学意义(P0.01)。与模型组相比较,维酶素组、升阳益胃汤中剂量组组P16蛋白的表达量增加,差异具有统计学意义(P0.05),升阳益胃汤高剂量组P16蛋白的表达量明显增大,差异具有统计学意义(P0.01),升阳益胃汤低剂量组P16蛋白的表达量的变化差异没有显著性(P0.05)。与模型组相比较,维酶素组、升阳益胃汤低剂量组P53蛋白的表达量增大,差异具有统计学意义(P0.05),升阳益胃汤高、中剂量组P53蛋白的表达量明显增大,差异具有统计学意义(P0.01)5、荧光定量PCR各组大鼠胃黏膜P16、P53mRNA表达情况与空白组相比,模型组大鼠胃黏膜P16、P53m RNA表达量均降低,差距具有统计学意义(P0.05)。与模型组相比,升阳益胃汤高、中剂量组与维酶素组P16mRNA表达量均明显升高,差距具有统计学意义(P0.05),升阳益胃汤低剂量组P16mRNA表达量上升不明显,差异无统计学意义(P0.05);与模型组相比,各治疗组大鼠胃黏膜P53mRNA表达量均明显升高,差距具有统计学意义(P0.05)。6、Western blot法检测各组大鼠P16、P53蛋白相对表达量与空白组相比较,模型组大鼠胃黏膜P16、P53蛋白表达量明显降低,差异具有统计学意义(P0.05);与模型组相比,维酶素组以及升阳益胃汤高剂量组P16、P53蛋白表达量明显升高,差异具有统计学意义(P0.05),升阳益胃汤低剂量组大鼠P16、P53蛋白表达量虽有升高,但差异均无统计学意义(P0.05)。结论首先本研究通过以MNNG为基础的复合造模法复制PLGC模型,连续12周,结合病理黏膜状态分析,成功复制PLGC模型。而经过升阳益胃汤干预后,大鼠胃黏膜MVD值,以及野生型P53与P16均明显升高,提示升阳益胃汤可能通过改善胃黏膜局部血液循环状态,升高抑癌基因P16与野生型P53的表达从而改善胃黏膜病理状态达到干预与治疗PLGC的目的。
【图文】：

图 1 各组大鼠 CD34 免疫组化 MOD 值组化检测各组大鼠 P16、野生型 P53 蛋白表达情况空白组相比，模型组大鼠 P16、P53 蛋白表达量明显降低，，差异具有统

各组大鼠胃黏膜P16表达情况
【学位授予单位】：甘肃中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5;R-332

【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 刘世炜;蔡s

本文编号：2643231