霍山石斛（栽培）抗炎多糖的结构鉴定及活性评价

发布时间：2020-04-28 22:22

【摘要】：霍山石斛(Dendrobium huoshanense)是我国一种传统的药用植物,其茎部位可经加工成为枫斗,是一种珍贵的补品。本文以栽培的霍山石斛茎部位为原料提取多糖,以小鼠Raw264.7巨噬细胞为模型评价多糖的抗炎活性,并对高活性组分的结构进行解析,对其抗炎信号转导机制进行探讨,以期为阐明霍山石斛多糖功能与结构之间的联系奠定基础。(1)以巨噬细胞释放炎性介质NO水平为指标,对霍山石斛不同成分进行活性导向分离,经脱脂、水提醇沉、DE-52阴离子交换树脂分离、乙醇分级,获得抗炎活性不同的5种组分,其中以多糖组分c DHP-W1抗炎活性最佳。(2)理化性质分析表明,c DHP-W1是一相对分子质量为24 k Da、主要由Man和Glc按1.00:8.21摩尔比所组成的均一多糖,其碳水化合物含量为97.79%,特性粘度(?)为0.7192,并含有4.3%乙酰基和1.4%的糖醛酸。高碘酸氧化、FT-IR、GC-MS及1D和2D NMR分析揭示,c DHP-W1的主链由1,4-linked-Glcp、1,4-linked-Manp和1,4,6-linked-Glcp所组成,其支链为T-linked-Glcp。(3)利用LPS诱导的巨噬细胞炎症模型,初步探讨了c DHP-W1的抗炎活性及其作用机制。浓度梯度实验表明,c DHP-W1能够剂量依赖地抑制LPS诱导的NO、PGE2、TNF-α和IL-1β等炎性介质的分泌,当浓度达到200μg/m L时,抑制效果最为显著。LPS及c DHP-W1处理时间实验表明,当c DHP-W1预处理时间为1 h、LPS处理时间为24 h时,c DHP-W1对NO、PGE2、TNF-α和IL-1β分泌的抑制效果最佳。RT-PCR分析表明,不同的LPS及c DHP-W1处理时间下,i NOS、COX-2、TNF-α和IL-1β的表达量各不相同,当c DHP-W1预处理时间为1 h、LPS处理时间为12 h时,c DHP-W1可显著下调i NOS、COX-2、TNF-α和IL-1β的表达。Western Blot分析表明,c DHP-W1预处理1 h可有效抑制LPS激发的p38、ERK、JNK的磷酸化和IκB、p65的核移位,提示c DHP-W1可通过抑制LPS激活的由TLR4介导的NF-κB和MAPK信号通路,从而抑制巨噬细胞炎性介质的表达与分泌。
【图文】：

霍山石斛,细胞活力,组分,醇沉

第三章结果与分析第三章结果与分析导向分离纯化石斛茎经脱脂、水提醇沉可以得到霍山石斛粗多糖（c-cDHP） sevge脱蛋白法处理后得到精制多糖 cDHP，用阴离子交换树脂 DE离得到水洗糖（cDHP-W）和盐洗糖（cDHP-S）两种组分，，其得率9%，8.6%。80%分级醇沉可以从 cDHP-W 中分离出醇沉糖（cDHP- 4.9%。以细胞活力为检测指标测定各组分对细胞是否具有毒性，以检测指标对各个组分进行抗炎活性筛选。

霍山石斛,抑制率,组分,抗炎活性

图 3. 2 霍山石斛各组分的 NO抑制率fig 3.2 NO inhibition rate of the components of Dendrobium huoshanense注：图中数据以三次平行试验结果平均值表示，其中*表示与正常组相比具有显著差p<0.05）,**表示与正常组相比具有极显著差异（p<0.01）。由图 3.2 结果发现，在霍山石斛各组分浓度为 25~400 μg/mL 的范围内，其 LPS 诱导产生的 NO 有一定的抑制效果，且显示出剂量依赖性。实验结果表cDHP、cDHP、cDHP-W、cDHP-W1 对 NO 分泌的最佳抑制浓度为 200 μg/m抑制率达到 33.8%。其中，cDHP-W1 表现出比其他霍山石斛组分更强的抗炎活性，表明 cDHP-W1 是霍山石斛中的的主要抗炎活性多糖。2 抗炎活性多糖 cDHP-W1 的结构解析2.1 理化性质利用葡聚糖凝胶 Sephedex S-200 对抗炎活性多糖 cDHP-W1 进一步纯化后理化分析，结果表明，cDHP-W1 的碳水化合物含量为 97.79%，特性粘度（
【学位授予单位】：合肥工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285;R284.1

【参考文献】