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酶辅助提取牡丹籽油及其改善果蝇认知障碍作用研究

发布时间:2020-04-29 13:39
【摘要】:本论文以牡丹种子为原料,通过酶辅助-正己烷萃取法提取牡丹籽油,并考察各因素对牡丹籽油得率的影响。在单因素实验基础上采用响应面法对牡丹籽油提取工艺进行优化,并测定种子油理化性质及其成分分析。并对牡丹籽油改善果蝇认知障碍作用进行研究。主要研究内容如下:1.采用酶辅助-正己烷萃取法提取牡丹籽油,通过单因素实验研究,确定了酶的种类、酶解pH值、酶解时间及酶解温度对牡丹籽油提取率的影响,在单因素实验的基础上采用响应面法对各影响因素进行优化。得到最优提取条件:pH=5.1,酶解时间为68min、酶解温度为50℃。在此条件下进行5次重复验证,牡丹籽油平均得率为38.2%。未经酶预处理组牡丹籽油得率为27.8%,最优条件下牡丹籽油得率较其提高了 37.4%。验证实验结果与回归方程预测值吻合性较好,此提取工艺条件可靠性较高。2.采用动植物油脂国标法(GB/T5530-2005、GB/T5532-2008、GB/T5538-2005、GB/T5534-2008、GB2716-2005)对牡丹籽油的酸值、碘值、过氧化值、皂化值、有机溶剂残留量进行测定,理化指标结果符合国家食用油标准。GC/MS检测技术分析测定甲酯化后牡丹籽油的主要成分。牡丹籽油的不饱和脂肪酸含量在90%左右,以亚麻酸和亚油酸为主,其中还包括棕榈酸、花生酸、亚油酸、亚麻酸、硬脂酸。亚麻酸含量很高,达到了 59%。酶预处理与未经酶预处理提取的牡丹籽油的主要成分几乎无差别。3.由巴普洛夫嗅觉逃避条件反射实验、嗅觉短期记忆能力及攀爬能力果蝇行为学实验,分别检测正常组、阳性对照组、模型组、牡丹籽油组果蝇的嗅觉短期记忆能力和攀爬能力。实验结果显示,牡丹籽油可以显著提高转tau基因果蝇的攀爬能力并改善认知功能障碍。4.通过Gal4/UAS系统原理杂交获得野生型对照果蝇和阿尔茨海默病AD果蝇模型(转tau基因),并做病理切片实验,进行果蝇模型鉴定。AD果蝇造模成功后,根据实验要求,随机分成6组,分别是正常组、模型组、牡丹籽油低剂量组(0.2%组)、牡丹籽油中剂量组(1%组)、牡丹籽油高剂量组(5%组)、阳性对照组。给药30天后测定果蝇脑组织中cAMP及AchE的含量,并观察喂养牡丹籽油后果蝇脑部病理变化。实验结果表明牡丹籽油能够减少转tau基因果蝇脑部病变空泡及神经纤维缠结。降低果蝇脑内cAMP水平,抑制AchE活性,从而提高果蝇学习记忆能力,改善认知功能障碍。
【图文】:

标准曲线,光吸收,标准曲线,葡萄糖


实验溶液的配置逡逑萄糖标准液:配置浓度为lmg/mL的葡萄糖标准溶液。4°C冰箱中保存备用。逡逑S溶液配置逡逑称取3,邋5-二硝基水杨酸0.63g于50mL大烧杯中,用少量蒸馏水溶解后,加邋(0.8g于100ml)氧氧化钠溶液26.2mL,再加到50mL含有18.5g酒石酸钟钠中,再加0.5g结品酚和0.5g无水亚硫酸钠,揽拌溶解,冷却后移入100mL容馏水定容至lOOmL,充分混匀。保存于棕色瓶中,室温放置一周后使用。逡逑mol/LpH=4.8醋酸缓冲溶液逡逑制O.lmol/L醋酸钠,再定容(根据缓冲液的用量来确定是要250ml、500ml然后用pH计测定酸度,再用冰醋酸调节pH值至4.8.逡逑羧甲基纤维素钠水溶液(CMC):用0.1mol/LpH4.8醋酸-醋酸钠缓冲溶液配萄糖标准品溶液稀释成不同浓度,充分摇匀后加入2mlDNS溶液,沸水浴lOm后加蒸馏水定容到25mL,于550nm下测OD值,1号为空白调零管。以含量,以OD值为纵坐标,绘制葡萄糖标准曲线如图2-1。其回归方程为:x-0.0404,邋R2=0.9997。逡逑标准葡萄糖光吸收曲线(OD值)逡逑

籽油,牡丹,酶解时间,相互作用


逦逡逑A2逦49.03逦1逦49.03逦76.87逦<0.0001逡逑B2逦11.64逦1逦11.64逦18.24逦0.0037逡逑C2逦7.82逦1逦7.82逦12.25逦0.0100逡逑残差逦4.47逦7逦0.64逡逑失拟项逦1.97逦3逦0.66逦1.05逦0.4628逦不显著逡逑纯误差逦2.50逦4逦0.63逡逑总差逦95.78逦16逡逑.3.4.2响应面图形分析及牡丹籽油最佳提取条件逡逑响应面图形作为响应值与试验因子A、B、C所构成的三维空间曲面图,可从分析图逡逑形象地看出各参数之间的相互作用。本试验根据回归方程进行了不同因子的响应面分逡逑,结果如图2-5?2-7所示。由图可看出,三个响应面开口皆向下,随着各因素变量的逡逑大,响应值增大,当响应值增大到极值后,随着因素变量的增大,响应值逐渐减小。逡逑H值、酶解时间、酶解温度这三个因素与牡丹籽油得率呈抛物线关系,,且在考察范围内逡逑在响应值的极高值。逡逑
【学位授予单位】:东北林业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R284;R285.5

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本文编号:2644636

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