光甘草定提取纯化及抗银屑病作用和机理研究

发布时间：2020-04-29 23:23

【摘要】：银屑病由多基因遗传、多环境因素刺激诱导的免疫异常性炎症性增生性皮肤病,主要表现IL-23/IL17炎症反应轴上相关因子的调节。市场上多数治疗银屑病的药物如糖皮质激素、维生素A衍生物、水杨酸、喜树碱、雷公藤内酯等,长期使用对机体肝、肾和免疫功能有严重损坏作用。近年学者提出:“中医与中西医结合是防治牛皮癣(银屑病)的方向”。光甘草定是从甘草植物提取出的天然产物,已有百年的药用历史,在抗炎抗氧化和治疗痤疮等方面有广泛的应用,此外,光甘草定长期作为护肤品成分,本文以探索光甘草定在治疗银屑病的方面的作用和机理研究为重点。具体研究内容和结果如下:1)光甘草定的分离纯化及结构鉴定。本文采取用乙酸乙酯回流2h,料液比为1:10的提取方法,通过两次层析分离,最后用半制备液相得到光甘草定纯品。通过高效液相和核磁共振进行纯度及结构确认。建立高效液相快速检测光甘草定含量方法。2)光甘草定的抗银屑病活性研究。首先建立咪喹莫特乳剂(IMQ)诱导的小鼠银屑病耳廓肿胀模型和背部皮肤破损模型。其次,根据光甘草定(PT)在人体皮肤用药标准设置不同浓度进行给药。1)对小鼠耳廓红肿程度的进行表观观察以及打孔称重后发现,在PT(30 g/kg、15 g/kg)时明显抑制效果,抑制率高达68.37%和56.98%。2)对小鼠背部皮肤红肿、鳞屑、肿胀程度的进行PAIS评分,绘制趋势线以观察各组小鼠皮损的变化情况,发现PT(30 g/kg、15 g/kg)组小鼠具有明显的抑制效果。最后,针对上述结果采用了HE染色方法从组织形态方面观察组织肿胀和损伤作用,研究发现,正常组的耳朵和背部皮肤的组织形态表现正常;单独使用IMQ时,小鼠耳朵和背部皮肤角质层明显增厚和炎性细胞浸润增多(细胞固缩);FK组和PT组组均有一定的抑制作用,通过对比发现PT(30 g/kg、15 g/kg)组小鼠的耳朵和背部皮肤切片的变化更明显,包括耳朵和皮肤肿胀程度明显降低(趋于正常组)以及细胞核与细胞质的比例明显变小等,活性优于阳性药。(3)光甘草定的抗银屑病机理研究。收集上述的小鼠银屑病组织样品,提取蛋白和转录基因。通过荧光定量PCR(RTF-QPCR)和免疫组织化学法(IHC)检测组织中各目标因子的表达情况。实验结果发现,IMQ单独使用时小鼠皮肤中的P65、IFN-γ、IL-17A、IL-6、COX-2、IL-22、IL-23、CD4、CD8?的表达量明显的增加,各PT组对这些炎症介质均有一定程度的抑制效果,其中高浓度30 g/kg组的抑制作用最强,并且比阳性药好。由此可见,光甘草定是通过抑制上IL-23/IL17炎症反应轴以多个炎症因子表现出抗银屑病的作用。综上所述,本论文从光甘草定提取检测以及抗银屑病活性和病理方面研究,可为光甘草定在银屑病中的应用提供理论和实验依据。
【学位授予单位】：广东工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284;R285

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本文编号：2645107