金雀异黄酮预防高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝的作用研究

发布时间：2020-04-30 11:41

【摘要】：近年,非酒精性脂肪肝病(NAFLD)呈现低龄化发展和患病率升高的趋势,且NAFLD发病机制复杂多样,目前普遍认为,NAFLD的发生与胰岛素抵抗、肥胖和血脂异常等因素有关。临床研究表明,抗凝疗法可以改善NAFLD,而凝血VA烷A2(TXA2)通路与脂类物质花生四烯酸的代谢有关,大豆提取物金雀异黄酮具有降低血脂的作用,所以本研究用金雀异黄酮干预高脂饮食诱导的NAFLD小鼠,探究金雀异黄酮对NAFLD的预防作用和其对TXA2通路的影响以及可能作用机制。主要研究内容如下:首先,研究金雀异黄酮对小鼠NAFLD的预防作用。将4周龄C57BL/6J雄性小鼠,随机分为5组:正常对照组(Normal Control,NC)、高脂对照组(High Fat Diet,HFD)、低剂量金雀异黄酮组(Low Dose Genistein,LGEN)、高剂量金雀异黄酮组(High Dose Genistein,HGEN)、阿司匹林阳性对照组(Aspisin,ASA)。研究金雀异黄酮对小鼠体重、血糖、基础代谢指标以及血脂指标等的影响。结果发现,与HFD组相比,金雀异黄酮可以降低小鼠体重,改善胰岛素抵抗与葡萄糖耐受,降低肝重、肝重指数、附睾白色脂肪重,降低高脂饮食小鼠血浆中TG、TC、ALT、AST、LDL-C以及前列腺素系列指标的水平。肝脏切片HE染色显示,干预组小鼠未见明显的脂肪变性与脂滴聚集,肝细胞排列整齐。血浆和肝脏中的TNF-α水平显著下降。HFD组小鼠肝脏中凝血VA烷受体(TBXA2R)显著增加。然后,研究金雀异黄酮对TNF-α诱导的人肝癌细胞(Hep-G2)胰岛素抵抗的改善作用。测定金雀异黄酮对Hep-G2细胞的毒性,并进行预处理后诱导体外胰岛素抵抗模型,使用WB法测定细胞中磷酸化的胰岛素受体(P-IR)和胰岛素受体底物(P-IRS1)表达量的变化。结果发现,与模型组细胞相比,金雀异黄酮可以上调Hep-G2细胞中PIR和P-IRS1蛋白的表达量,改善细胞的胰岛素抵抗。最后,探究金雀异黄酮改善胰岛素抵抗的作用靶点。将Hep-G2细胞进行转染,沉默TBXA2R基因后,以SQ29548为阳性对照物,I-BOP为阴性对照物,用金雀异黄酮预处理后,诱导胰岛素抵抗模型。结果发现,当Hep-G2细胞中TBXA2R基因沉默后,金雀异黄酮不能改善其由TNF-α诱导的胰岛素抵抗。细胞中P-IR和P-IRS1蛋白的表达量与细胞消耗葡萄糖量的检测结果一致。综合分析金雀异黄酮对小鼠NAFLD的预防作用和对Hep-G2细胞胰岛素抵抗的改善作用,发现金雀异黄酮可以通过调节花生四烯酸的代谢,作用于TXA2通路,改善胰岛素抵抗,进而预防高脂饮食诱导的NAFLD的发生。
【图文】：

异黄酮含量,异黄酮,雌激素作用,高脂膳食

第果与讨论3 结果与讨论金雀异黄酮的含量酮因其具有雌激素作用，现已作为一种新型饲料添加剂被广泛应异黄酮作为功能成分对于高脂膳食诱导的 NAFLD 的影响，为更需对维持饲料和合成高脂饲料中所含有的金雀异黄酮进行定量。准品金雀异黄酮进行高效液相分析，发现其在 260 nm 处的最大吸5.45 min 附近，采用 260 nm 作为检测波长测定饲料样品中金雀异黄相色谱图结果可知，NC 组饲料样品，在 5.43 min 处有一个吸收样品在 5.45 min 附近没有峰，如图 3-1 所示。故可判断在 NC 组饲的金雀异黄酮，而 HFD 组饲料中则未检测到金雀异黄酮的存在。

诱导方法,动物

故可以忽略维持饲料中所含有的金雀异黄酮对于试验的黄酮干预 NAFLD 小鼠体内试验验，长期高脂饲料喂养 C57BL/6J 小鼠，诱导 NAFLD 模型。%，过多的脂肪摄入易导致小鼠体内脂肪堆积而产生肥胖，同升高，而多数学者认为 NAFLD 与胰岛素抵抗关系密切[96]，是重要表现[97]。近期研究发现，肝脏内过度的脂肪动员和甘油三的游离脂肪酸，造成肝脏脂毒性，其关键因素是胰岛素抵抗[98][血脂异常等都会促进 NAFLD 的发生和发展。因此常用高脂饮食人类脂肪肝的发展过程极为相似，是小鼠 NAFLD 模型的常用血症和胰岛素抵抗向 NAFLD 转变的过程，方法简单，成模率高物福利要求，，由于试验周期较长，本试验未采用灌胃方式，而鼠饲料中，阿司匹林溶解于水中，每天更换。采用文献方法[100EN 和 HGEN 组每千克小鼠饲料中分别添加 400mg、800mg 的每 1 L 水中添加 200 mg 阿司匹林。其饲养过程如图 3-2 所示。
【学位授予单位】：江南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

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