益气泻肺汤抑制慢性心力衰竭保护心肌作用机制的研究

发布时间：2020-05-06 12:37

【摘要】：目的:利用阿霉素诱导心力衰竭模型,探讨益气泻肺汤治疗慢性心力衰竭保护心肌组织的作用机制。通过利尿试验验证益气泻肺汤临床功效。方法:1.应用阿霉素(ADR)诱导Wistar大鼠慢性心力衰竭模型,动物随机分为空白组、心力衰竭模型组、阳性药芪苈强心胶囊0.33g/kg组、益气泻肺汤17.5g生药/kg组、益气泻肺汤8.75g生药/kg组、益气泻肺汤4.38g生药/kg组。益气泻肺汤连续给药8周,观察动物心功能、心重指数等生理指标,并采用ELISA、HE染色、Masson染色和TUNEL染色及透射电镜、Western Blot等检测技术方法,观察心脏功能、心肌细胞损伤、凋亡、氧化应激反应、炎性因子释放、超微结构改变等生理、生化、病理指标的情况。明确益气泻肺汤对慢性心力衰竭的防治作用,探讨其作用机制。2.雄性Wistar大鼠,随机分为空白组,阳性药芪苈强心胶囊0.33g/kg组、益气泻肺汤17.5g生药/kg三个组,分别观察末次给药后0-2小时、2-4小时动物的尿量,计算4小时内总排尿量,并进行组间比较。结果:1.对阿霉素诱导大鼠慢性心衰模型的影响1.1益气泻肺汤对阿霉素诱导心衰大鼠心功能影响与空白组比较,模型组舒张压增加(p0.01),左室内压最大值降低(p0.05),左室内压最大上升速率(+dp/dt max)和下降速率(-dp/dt max)显著降低(p0.05,p0.01)。与模型组比较,益气泻肺汤17.5g生药/kg组心率显著增加(p0.05);益气泻肺汤17.5g生药/kg组、8.75g生药/kg组左室收缩压(LVSP)、+dp/dt max和-dp/dt max均增加(p0.01、p0.05)。1.2益气泻肺汤对阿霉素诱导心衰大鼠心重指数影响与空白组比较,模型组心衰大鼠体重,去腹水体重,心脏重量均极显著降低(p0.001),腹水重量极显著增加(p0.001)。与模型组比较,益气泻肺汤17.5g生药/kg组能够增加心衰大鼠去腹水体重和心脏重量(p0.01,p0.05),并减轻腹水重量(p0.05);益气泻肺汤8.75g生药/kg组能增加心脏重量(p0.01),并增加带腹水心重指数和去腹水心重指数(p0.05)。益气泻肺汤4.38g生药/kg组能够增加心脏重量(p0.05)。1.3益气泻肺汤对阿霉素诱导心衰大鼠细胞形态学影响HE染色,与模型组比较,益气泻肺汤17.5g生药/kg组、8.75g生药/kg组左心室肌壁厚度不同程度增加(p0.05)。Masson染色,与模型组比较,益气泻肺汤17.5g生药/kg组、8.75g生药/kg组心肌胶原分布面积比值明显减少(p0.05)。TUNEL染色,与模型组比较,益气泻肺汤17.5g生药/kg组、8.75g生药/kg组凋亡阳性染色细胞数量显著减少(p0.05)。透射电镜观察超微结构,益气泻肺汤17.5g生药/kg组细胞核结构正常;闰盘结构接近正常;肌丝束上肌节结构清晰可辨,明暗带清晰;局部线粒体增多,略致密,保持了心肌细胞完整结构。1.4益气泻肺汤对阿霉素诱导心衰大鼠血清相关因子水平影响与空白组比较,模型组动物血清中BNP含量极显著增加(p0.001)。与模型组比较,益气泻肺汤17.5g生药/kg组、8.75g生药/kg组均降低血清中BNp的含量(p0.001,p0.01)。结果显示,与空白组比较,模型组动物血清中SOD活性极显著降低(p0.001),MDA含量显著增高(p0.01),GSH-PX活力明显降低(p0.01)。与模型组比较,益气泻肺汤17.5g生药/kg组、8.75g生药/kg组能够增加血清中SOD活力(p0.05),益气泻肺汤4.38g生药/kg组能够显著增加血清中SOD的活力(p0.001)。1.5益气泻肺汤对阿霉素诱导心衰大鼠心肌组织中相关因子影响与空白组比较,模型组动物心肌组织中RyR2和Serca含量显著降低(p0.05),Na~+-K~+-ATpase含量有减少的趋势。与模型组比较,益气泻肺汤17.5g生药/kg组能够增加心肌组织中Na~+-K~+-ATpase含量(p0.01)、RyR2含量(p0.01)、Serca含量(p0.05);益气泻肺汤8.75g生药/kg组能够增加心肌组织中RyR2的含量(p0.05)。与空白组比较,模型组动物心肌组织中IL-6含量显著增高(p0.05),TNF-α含量显著增加(p0.01)。与模型组比较,益气泻肺汤17.5g生药/kg组能够降低心肌组织中IL-6的含量(p0.05)。1.6益气泻肺汤对阿霉素诱导心衰大鼠相关蛋白影响与空白组比较,模型组心肌组织中CaM蛋白表达有增加的趋势,而CaMKII蛋白表达则显著增加(p0.05)。与模型组比较,益气泻肺汤17.5g生药/kg组、8.75g生药/kg组、4.38g生药/kg组均能减少心肌组织中CaMKII蛋白表达(p0.05、p0.01、p0.01)。与空白组比较,模型组心肌组织中NF-κB蛋白表达有增加的趋势,TLR4蛋白表达则显著增加(p0.05)。与模型组比较,益气泻肺汤17.5g生药/kg组能降低心肌组织中TLR4蛋白表达(p0.05),NF-κB蛋白表达也有降低的趋势。与空白组比较,模型组动物心肌组织中Bcl-2蛋白表达降低(p0.05),Bax、caspase-3、caspase-8蛋白的表达增加(p0.05),此外caspase-9表达也有增加的趋势。与模型组比较,益气泻肺汤17.5g生药/kg组能够增加Bcl-2蛋白表达(p0.05),并且降低Bax和caspase-3的表达(p0.05);益气泻肺汤8.75g生药/kg组能够降低Bax蛋白表达(p0.05),增加Bcl-2蛋白表达(p0.05);益气泻肺汤4.38g生药/kg组能够降低心肌组织中Bax表达(p0.05)。2.对大鼠尿量的影响结果显示,与空白组比较,益气泻肺汤17.5g生药/kg组2-4小时及0-4小时期间的尿量明显增加(p0.05,p0.01)。与阳性对照组比较,益气泻肺汤17.5g生药/kg组0-2小时、2-4小时及4个小时总尿量明显增加(p0.05,p0.01,p0.001)。结论:1.从组织形态学观察益气泻肺汤能有效保护心肌组织,减少心肌细胞损伤,减少心肌纤维化,降低室壁肌张力,防止心室重构;益气泻肺汤能增加Na~+-K~+-ATp的含量,增加心肌组织中RyR2和Serca的含量,减少心肌组织中CaMkⅡ蛋白表达,增强心肌正性肌力,改善心衰患者心肌舒缩功能;益气泻肺汤高剂量组能降低心肌组织中IL6含量,显著抑制心衰大鼠心肌组织TLR4及NF-κB蛋白表达水平,从而抑制炎症反应;益气泻肺汤能够使促凋亡Caspase-8、Caspase-3及Bax蛋白表达显著降低,抗凋亡Bcl-2蛋白表达显著增加,发挥抗细胞凋亡作用,进而保护心肌组织,缓解心力衰竭的发展。这些可能是益气泻肺汤防治心衰的作用机制,为临床治疗心衰提供了新的治疗靶点。2.通过尿量试验体现益气泻肺汤具有泻肺利水功效,大鼠益气泻肺汤17.5g生药/kg利尿作用显著,其利尿作用优于阳性药组。
【图文】：

图 1 益气泻肺汤对阿霉素诱导心衰大鼠心肌组织病理学的影响（HE 染色）3.3.2 益气泻肺汤对阿霉素诱导心衰大鼠心肌纤维化的影响采用 Masson 染色来进一步探讨益气泻肺汤对 ADR 诱导的HF 大鼠心肌组织纤维化的影响，结果显示如下：空白组 Masson 染色，心室内少量乳头肌连接处可见少量蓝染的胶原纤维分布，心肌间大血管外膜周围可见少量蓝染的胶原纤维分布，属于正常胶原纤维分布位置的染色结果，心肌间质内未见异常蓝染的胶原纤维分布。模型组 Masson 染色，乳头肌处心肌可见大面积的明显蓝染的胶原纤维分布，心肌间交错分布蓝染的胶原纤维，心肌纤维分布明显增加。阳性对照组 Masson 染色，乳头肌处心肌可见蓝染的胶原纤维分布，心肌纤维分布面积减少。益气泻肺汤 17.5g 生药/kg 组 Masson 染色，乳头肌处心肌可见少量蓝染的胶原纤

长春中医药大学 2019 届博士学位论文益气泻肺汤 17.5g 生药/kg 组、益气泻肺汤 8.75g 生药/kg 组胶原分布面积比值明显减少，与模型组比较，差异有统计学意义（p<0.05）。结果见表 7、图 2。表 7. 左心室心肌组织胶原分布面积比值（—X±S）组别 动 物 数（只）胶原分布面积比值（%）空白组 12 1.35±1.34**模型组 12 3.77±2.30芪苈强心胶囊 0.33g/kg 组 12 2.12±1.19*益气泻肺汤 17.5g 生药/kg 组 12 2.00±1.66*益气泻肺汤 8.75g 生药/kg 组 12 1.56±1.76*益气泻肺汤 4.38g 生药/kg 组 12 2.34±2.16注：与模型组比较，，*p<0.05，** p<0.01。
【学位授予单位】：长春中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

【参考文献】

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本文编号：2651269