四逆软肝方对乙醛作用下的人肝星状细胞肝纤四项及MMP-1、TIMP-1的影响

发布时间：2020-05-06 21:16

【摘要】：目的:观察四逆软肝方对乙醛作用下的人肝星状细胞肝纤四项(CG、HA、LN、PCⅢ)及MMP-1、TIMP-1的影响,探讨其抗肝纤维化的机制及作用。方法:1、取LX-2细胞(浓度为1x10~5个/m L)接种于无菌96孔培养板中,200μL/孔,放置培养箱培养24h,待细胞长满单层,弃培养液。加入不同浓度的乙醛作用24h、48h、72h后(每24h换液一次),采用CCK-8法检测细胞的OD值,分析乙醛对LX-2细胞损伤的程度,并选取细胞存活率最高的乙醛浓度和时间作为实验的损伤浓度及时间。2、将LX-2细胞接种于无菌96孔板,待细胞长满单层后,随机分为正常组(正常培养液培养),乙醛组(含250mmol/L乙醛的细胞培养液培养),培养72h(每24h换液一次),搜集两组细胞培养液上清待测,继续将乙醛组LX-2细胞随机分为脱离组、四逆组、清热组、扶正组;四逆组、清热组、扶正组分别用其相对应的含药血清培养,脱离组及正常组用正常培养液培养,培养24h,搜集各组细胞培养液上清待测。3、采用ELISA试剂盒对各组细胞培养液上清进行肝纤四项及MMP-1、TIMP-1的检测。结果:1.不同乙醛浓度及时间对LX-2细胞的损伤不同,其中250mmol/L乙醛培养72小时,损伤最小,细胞存活率最高。2.在实验室细胞倒置显微镜下(200倍)观察,与正常组相比,乙醛组细胞密度明显稀疏,细胞形态未改变。3.与正常组相比,乙醛组PCⅢ含量明显升高,差异有统计学意义(P㩳0.01),CG、HA、LN、MMP-1、TIMP-1的含量无统计学差异(P0.05)。4.与脱离组比较,四逆组HA、PCⅢ、TIMP-1均明显降低(P㩳0.01,P㩳0.05);CG、LN、MMP-1无统计学差异(P0.05)。5.四逆组、清热组、扶正组三组间无差异(P0.05)。结论:四逆软肝方可降低受损的LX-2细胞HA、PCⅢ、TIMP-1指标的表达,可能有一定的抗肝纤维化作用。
【图文】：

乙醛,倒置显微镜,细胞,存活率

1 不同浓度乙醛和作用时间对 LX-2 细胞的影响（n=3）含 50mmol/L 乙醛的细胞培养液含 100mmol/L 乙醛的细胞培养液含 150mmol/L 乙醛细胞培养液D 值( s) 存活率（%）OD 值( s) 存活率（%）OD 值( s) 存活（%257 0.028 20.7 0.246 0.064 19.9 0.510 0.066 41205 0.041 13.1 0.225 0.035 14.4 0.554 0.088 35201 0.001 16.3 0.212 0.007 17.3 0.518 0.048 42 乙醛作用 72 小时后 LX-2 细胞情况形态学观察胞倒置显微镜下（ 200 倍）观察，，与正常组相疏，形态未改变。见图 1。A B

细胞,倒置显微镜,形态,情况

液上清中肝纤四项及 MMP-1、 TIMP-1 水平的比HA（ ng/ml）LN（ ng/ml） PCIII（ ng/ml）MMP-1（ ng/m20.89 3.34 30.80 12.86 7.46 0.10 17.64 20.59 1.20 37.89 6.66 32.44 8.74△△17.32 相比，△△P㩳 0.01；后 LX-2 细胞情况形态学观察胞倒置显微镜下（ 200 倍）观察，与正常组离组比，各给药组细胞疏密度、形态学上均AC
【学位授予单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】